漆酶測試盒

漆酶測試盒

微量法 100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬於(yu) 銅藍氧化酶家族，廣泛分布於(yu) 真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環境汙染物降解和木質纖維素降解以及生物檢測方麵有非常廣泛的應用。

測定原理

漆酶分解底物ABTS產(chan) 生ABTS自由基，在420nm處的吸光係數遠大於(yu) 底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 30mL×1瓶，4℃保存。

工作液：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨(lin) 用前加15mL試劑一溶解；用不完的試劑4℃保存一周。

酶液提取

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min，取上清，置冰上待測。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後4℃，10000g離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3. 細胞培養(yang) 液：直接檢測。

測定操作表

注意：

1. 極少數樣本在60℃水浴20min後會(hui) 出現沉澱，可經過8000g 25℃離心10min後，取上清檢測，例如成熟的水稻葉片樣本。

2. 為(wei) 確保檢測準確性，若ΔA大於(yu) 1，將樣本用提取液稀釋2~10倍後重新檢測，計算公式乘以相應稀釋倍數。

酶活性計算公式

a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克樣品每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /104 cell）= ×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷細胞數量

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每升培養(yang) 液每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /L）= ×V反總÷V樣÷T= 9260×△A

ε：ABTS毫摩爾消光係數：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體(ti) 積，0.3mL；V樣：反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.03mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，20min

b. 用96孔板測定的計算公式如下

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18.52×△A÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克樣品每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 18.52×△A÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /104 cell）= ×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

= 18.52×△A÷細胞數量

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每升培養(yang) 液每分鍾氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

漆酶活性（nmol/min /L）= ×V反總÷V樣÷T= 18520×△A

ε：ABTS毫摩爾消光係數：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應總體(ti) 積，0.3mL；V樣：反應中樣本體(ti) 積，0.045mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，20min

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