堿性蛋白酶測試盒

堿性蛋白酶測試盒

微量法 100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

AKP是指在堿性條件下催化蛋白質肽鍵水解的酶類，屬於(yu) 絲(si) 氨酸蛋白酶。此外，該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵，具有轉酯及轉肽的功能。該酶是主要工業(ye) 用酶之一，廣泛應用於(yu) 製藥、絲(si) 綢、食品、製革等行業(ye) 。

測定原理：

在堿性條件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸生成鎢藍；鎢藍在680nm有特征吸收峰，測定680nm吸光度增加速率，來計算AKP活性。

自備儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨(lin) 用前加5mL蒸餾水溶解。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨(lin) 用前加入10mL試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發，一般加熱15-30分鍾，該試劑為(wei) 過飽和試劑，充分混勻後仍出現顆粒物不溶物不影響使用）。

試劑四：粉劑×1瓶， 4℃保存。臨(lin) 用前加20mL蒸餾水溶解。

試劑五：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存。

標準品：液體(ti) 1mL×1支，0.25μmol/mL標準酪氨酸溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。

血清或培養(yang) 液：直接測定。

細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後8000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長到680 nm，蒸餾水調零。

2.試劑二、試劑三和試劑四置於(yu) 40℃水浴保溫30min。

3. 對照管：取0.5 mL EP管，加入20 μL粗酶液，40 μL試劑二，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫10min；加入40μL試劑三，混勻後8000g ，4℃離心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL試劑四，40μL試劑五，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫20min，吸取200μL於(yu) 680nm測定光吸收，記為(wei) A對照管。

4. 測定管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL試劑三，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫10min；加入40μL試劑二，混勻後8000g，4℃離心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL試劑四，40μL試劑五，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫20min，吸取200μL於(yu) 680nm測定光吸收，記為(wei) A測定管。（注意與(yu) 空白管不同，先加試劑三，後加試劑二）

5. 空白管：取0.5 mL EP管，加入40μL蒸餾水，200μL試劑四，40μL試劑五，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫20min，吸取200μL於(yu) 680nm測定光吸收，記為(wei) A空白管。

6. 標準管：取0.5 mL EP管，加入40μL標準品，200μL試劑四，40μL試劑五，混勻後置於(yu) 40℃水浴保溫20min，吸取200μL於(yu) 680nm測定光吸收，記為(wei) A標準管。

注意：空白管和標準管隻需要測定一次。

計算公式：

1. 按照樣本蛋白濃度計算

AKP活性單位定義(yi) ：30℃每毫克蛋白每分鍾水解產(chan) 生1nmol酪氨酸為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AKP活性（nmol/min /mg prot）= C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

AKP活性單位定義(yi) ：30℃每克樣品每分鍾催化水解產(chan) 生1 nmol酪氨酸為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AKP活性（nmol/min /g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W

3. 按照液體(ti) 體(ti) 積計算

AKP活性單位定義(yi) ：30℃每毫升樣品每分鍾催化水解產(chan) 生1nmol酪氨酸為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AKP活性（nmol/min/mL）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷V1÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）

按照細胞數量計算

AKP活性單位定義(yi) ：30℃每104個(ge) 細胞每分鍾催化水解產(chan) 生1nmol酪氨酸為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AKP活性（nmol/min /104 cell）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（細胞數量×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷細胞數量

C標準品：0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液；V反總：酶促反應總體(ti) 積，0.1mL；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL）；V1：加入反應體(ti) 係中粗酶液體(ti) 積（mL），0.02 mL；V2：提取液總體(ti) 積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min；W：樣品質量（g）。

注意事項：

臨(lin) 用前配製的試劑配置好後3天內(nei) 使用完畢。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

堿性蛋白酶測試盒