磷脂酶A2（PLA2）測試盒

磷脂酶A2（PLA2）測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，廣泛存在於(yu) 動植物組織、細菌、細胞核分泌物中，參與(yu) 脂肪消化，精子成熟、細胞信號傳(chuan) 遞、脂質過氧化修複、宿主反應等生理過程，在控製體(ti) 內(nei) 磷脂類物質平衡、調節機體(ti) 新陳代謝、參與(yu) 疾病的病理進程等方麵發揮著及其重要的作用。

測定原理

磷脂酶A2作用於(yu) 2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產(chan) 生遊離巰基，與(yu) DTNB反應生成黃色物質，在412nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、超速冷凍離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配製    

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) ×5瓶，-20℃避光保存。臨(lin) 用前根據用量每瓶加入1.8mL試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

樣品處理

1. 組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿後於(yu) 4℃，10000g離心5min，取全部上清於(yu) 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉澱溶於(yu) 1mL試劑一。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後於(yu) 4℃，10000g離心5min，取全部上清於(yu) 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉澱溶於(yu) 1mL試劑一。

3. 血清：直接測定。

測定操作

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 73.53×△A÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克組織每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 73.53×△A÷W

3. 細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（×d）×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

= 73.53×△A÷細胞數量

4按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每毫升血清每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/mL）= △A÷（×d）×V反總÷V樣÷T

= 73.53×△A

：TNB消光係數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體(ti) 積，1mL；V樣：反應體(ti) 係中加入樣本體(ti) 積，0.1mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；

T：反應時間，10min

b. 用96孔板測定的計算公式如下

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

=147.06×△A÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克組織每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 147.06×△A÷W

3. 細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（×d）×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

=147.06×△A÷細胞數量

4按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每毫升血清每分鍾水解HEPC產(chan) 生1nmol遊離巰基所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLA2活性（nmol/min/mL）= △A÷（×d）×V反總÷V樣÷T

= 147.06×△A

：TNB消光係數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應總體(ti) 積，1mL；V樣：反應體(ti) 係中加入樣本體(ti) 積，0.1mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；

T：反應時間，10min

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

磷脂酶A2（PLA2）測試盒