磷脂酶C（PLC）測試盒

磷脂酶C（PLC）測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

磷脂酶C（EC3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯C3位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶，廣泛存在於(yu) 微生物及動植物的組織和細胞中，在細胞代謝、細胞傳(chuan) 遞、生長發育等方麵具有重要作用。

測定原理

磷脂酶C催化水解NPPC產(chan) 生對硝基苯酚，在410nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 102mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體(ti) 8mL×1瓶，4℃保存。

酶液提取

1. 組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿後於(yu) 4℃，10000g離心5min，取全部上清於(yu) 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉澱溶於(yu) 1mL試劑一。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後於(yu) 4℃，10000g離心5min，取全部上清於(yu) 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉澱溶於(yu) 1mL試劑一。

3. 血清：直接測定。

測定操作

酶活計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克組織每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細胞數量

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每毫升血清每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T

= 17.45×（△A+0.0103）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.02mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0095x - 0.0103，R2 = 0.9991

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T

= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克組織每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

= 35.09×（△A+0.0103）÷ W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量) ÷T

=35.09×（△A+0.0103）÷ 細胞數量

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每毫升血清每分鍾水解NPPC產(chan) 生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷V樣÷T

= 35.09×（△A+0.0103）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.02mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

磷脂酶C（PLC）測試盒