酪氨酸解氨酶(TAL)測試盒

酪氨酸解氨酶(TAL)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：                           

TAL廣泛存在於(yu) 植物和微生物中，是苯丙氨酸代謝途徑的關(guan) 鍵酶之一。TAL能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪氨酸轉化為(wei) 香豆酸，香豆酸可進一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類天然產(chan) 物。

測定原理：

TAL能夠分解酪氨酸產(chan) 生香豆酸，使反應溶液333nm下的吸光度隨反應時間而上升，根據吸光度的變化率可計算出TAL活性。

需自備的儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 50mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；

試劑三：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）果汁等液體(ti) 樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至333nm。

2. 準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板隻能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小於(yu) 340nm務必使用UV板）。

3. 試劑二的配置：臨(lin) 用前在試劑二瓶中加入10mL試劑一充分溶解待用（用不完的試劑4℃保存一周，注意現配現用），在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

4、在EP管中依次加入如下試劑

混勻，10000g 4℃離心5min，取200μL上清至96孔UV板，333nm下測定吸光值A測定與(yu) A對照，ΔA=A測定-A對照

TAL活性計算：

1、血清（漿）或果汁TAL活性

單位的定義(yi) ：每分鍾每mL血清（漿）或果汁在每mL反應體(ti) 係中使333nm處吸光值變化

0.005為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

TAL（U/mL）=ΔA×V反總÷( V樣÷V樣總)÷0.005÷T =35×ΔA

2、組織、細菌或細胞TAL活性

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義(yi) ：每分鍾每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中使333nm處吸光值變化0.005為(wei) 一個(ge)

酶活力單位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位定義(yi) ：每分鍾每g組織在每mL反應體(ti) 係中使333nm處吸光值變化0.005為(wei) 一個(ge)

酶活力單位。

TAL（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義(yi) ：每分鍾每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞在每mL反應體(ti) 係中使333nm處吸光值變化0.005為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

TAL（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.42mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.04mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，60 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) 。

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