超氧化物歧化酶（SOD）測試盒

超氧化物歧化酶（SOD）測試盒

 微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

 SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，催化超氧化物陰離子發生岐化作用，生成H2O2和O2。SOD不僅(jin) 是超氧化物陰離子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化係統中具有重要作用。

測定原理：

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應係統產(chan) 生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臢，後者在560nm處有吸收；SOD可清除O2-.，從(cong) 而抑製了甲臢的形成；反應液藍色越深，說明SOD活性愈低，反之活性越高。

需自備的儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) 、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體(ti) 200μL×1支，4℃保存；

試劑三：液體(ti) 4mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2瓶，4℃保存。

粗酶液提取： 

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500  萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至560nm。

2. 將試劑二用蒸餾水稀釋兩(liang) 倍，用多少配多少。（試劑二和蒸餾水1：1稀釋）

3. 將一瓶試劑四用5mL蒸餾水溶解（溶解後一周內(nei) 用完），再用蒸餾水稀釋4倍，用多少配多少（試劑四和蒸餾水1：3稀釋）。

4. 測定前將試劑一、三和四在37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）水浴5min以上。

5. 樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置30min後，560nm處測定各管吸光值A。

注意事項：

1、試劑二為(wei) 酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管隻需要做一管。

3、若對照管吸光值大於(yu) 1，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍後使用（10μL試劑二原液+60μL蒸餾水）。

4、SOD為(wei) 什麽(me) 有的樣本測定管大於(yu) 對照管，對照管數值在什麽(me) 範圍？

對照管的範圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現配現用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書(shu) 稀釋相應倍數。

若出現測定管大於(yu) 對照管，可能是樣本中雜質的影響太大，為(wei) 了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍後再測，通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

SOD活性計算：

1、抑製百分率的計算

抑製百分率＝(A對照管－A測定管) ÷A對照管× 100%

盡量使樣本的抑製百分率在10-90%範圍內(nei) 。如果計算出來的抑製百分率小於(yu) 10%或大於(yu) 90%，則通常需要調整加樣量後重新測定。如果測定出來的抑製百分率偏高，則需將樣本用提取液適當稀釋；如果測定出來的抑製百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣本。

2、SOD酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯反應體(ti) 係中抑製百分率為(wei) 50%時，反應體(ti) 係中的SOD酶活力定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位(U/mL)。 

3、SOD酶活性計算：

（1）血清（漿）SOD活性(U/mL)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率)×V反總]÷V樣

=11.11×抑製百分率÷(1－抑製百分率)

（2）組織、細菌或培養(yang) 細胞SOD活力計算：

a.按樣本蛋白濃度計算

SOD活性(U/mg prot)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率)×V反總]÷(V樣×Cpr)

 =11.11×抑製百分率÷(1－抑製百分率)÷Cpr 

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

b.按樣本鮮重計算

SOD活性(U/g 鮮重)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率)×V反總]÷(W ×V樣÷V樣總)

 =11.11×抑製百分率÷(1－抑製百分率)÷W

c.按細菌或細胞個(ge) 數計算

SOD活力(U/104 cell)=[抑製百分率÷(1－抑製百分率) ×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)

 =0.022×抑製百分率÷(1－抑製百分率)

 V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.2mL；V樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.018mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL ；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) 。

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