賴氨酸（LYS）測試盒

賴氨酸（LYS）測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

賴氨酸是人體(ti) 必需氨基酸之一，能促進人體(ti) 發育、增強免疫功能，並有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為(wei) 堿性必需氨基酸。由於(yu) 穀物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為(wei) 第一限製性氨基酸。

測定原理：

蛋白質中的賴氨酸具有一個(ge) 遊離的ε-NH2，它與(yu) 茚三酮試劑反應生成藍紫色物質，其顏色的深淺在一定範圍內(nei) 與(yu) 賴氨酸的含量成線性關(guan) 係。亮氨酸與(yu) 賴氨酸的碳原子數目相同，而且僅(jin) 有—個(ge) 遊離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配製標準液。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

試劑的組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入12.5mL試劑三充分溶解混勻；

試劑二：液體(ti) 12.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：60%乙醇，自備。

賴氨酸提取：

樣本烘幹粉碎，稱取約0.01g樣本，加入1mL提取液，充分勻漿。80℃水浴提取20min，冷卻後10000g離心10min，取上清待測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。

2. 工作液的配製：取10mL試劑一與(yu) 10mL試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑4℃保存。

3. 在有蓋EP管中加入下列試劑：

混勻，80℃水浴30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。

混勻，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，於(yu) 530nm波長處記錄吸光值A。△A=A測定管-A空白管。空白管隻要做一管。

賴氨酸含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 0.0062x - 0.0212；x為(wei) 賴氨酸含量（µg/mL），y為(wei) 吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g幹重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.1mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1.1515，校正係數。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 0.0031x - 0.0212；x為(wei) 賴氨酸含量（µg/mL），y為(wei) 吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g幹重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.1mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1.1515，校正係數。

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