果糖1,6二磷酸(FDP)測試盒

果糖1,6二磷酸(FDP)測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

果糖1,6-二磷酸是機體(ti) 內(nei) 的高能代謝物和代謝調控劑，是糖酵解途徑的重要中間體(ti) ，廣泛存在於(yu) 動植物和微生物體(ti) 內(nei) ，能影響細胞內(nei) 鉀離子的濃度，改善葡萄糖和其他能量底物的代謝，促進組織氧的釋放，廣泛應用於(yu) 臨(lin) 床醫藥製劑。

測定原理

醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸降解，產(chan) 物與(yu) DNPH縮合成紫紅色物質，在540nm有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、低溫離心機、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配製    

試劑一：液體(ti) 110mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 0.4mL×1支，4℃避光保存。

試劑三：液體(ti) 4mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體(ti) 16mL×1瓶，4℃保存。

樣品處理

1. 組織：按照質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿後於(yu) 4℃，10000g離心10min，取上清待測。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後4℃，10000g離心10min，取上清待測。

3. 液體(ti) ：直接檢測。

測定操作

計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.6971x+0.0012，R2=0.9983

1．按照質量計算

FDP（mg/g 鮮重）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（W÷V樣總）

= 1.43×(△A-0.0012)÷W

2．按照細胞數量計算

FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（細胞數量÷V樣總）

=1.43×(△A-0.0012)÷細胞數量

3．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971

= 1.43×(△A-0.0012)

W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.3486x+0.0012，R2=0.9983

1．按照質量計算

FDP（mg/g 鮮重）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（W÷V樣總）

= 2.87×(△A-0.0012)÷W

2．按照細胞數量計算

FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（細胞數量÷V樣總）

= 2.87×(△A-0.0012)÷細胞數量

3．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486

= 2.87×(△A-0.0012)

W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL

注意事項

*低檢出限為(wei) 1.72 mg/L。

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