木質素過氧化物酶（LiP）測試盒

木質素過氧化物酶（LiP）測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

木質素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞(ya) 鐵血紅素的過氧化物酶，屬於(yu) 木質素降解酶係，在木質素生物降解、造紙工業(ye) 、紡織工業(ye) 、芳香化合物轉化與(yu) 降解及環境汙染控製等方麵具有較大的應用潛力。

測定原理

木質素過氧化物酶催化天青脫甲基，在651nm處測定吸光值減少。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、低溫離心機、酶標儀(yi) 、96孔板、可調式移液器、冰。

試劑組成和配製    

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨(lin) 用前加入115mL蒸餾水，充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存一個(ge) 月。

試劑二：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體(ti) 5mL×1支，4℃保存。

酶液提取

1. 組織：按照質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿後於(yu) 4℃，10000g離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後4℃，10000g離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3. 培養(yang) 液或其它液體(ti) ：直接檢測。                         

測定操作

1、酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至651nm。

2、臨(lin) 用前按每個(ge) 樣本試劑一：試劑二：試劑三=80:40:40（μL）的比例配製工作液，現配現用。

3、在96孔板中依次加入如下試劑

酶活計算公式

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A651變化0.01為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LiP活性（U/mg prot）= ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每g組織在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A651變化0.01為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LiP活性（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =250×ΔA÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A651變化0.01為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LiP活性（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=0.5×ΔA

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每mL血清（漿）在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A651變化0.01為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LiP活性（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =250×ΔA

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應中樣本體(ti) 積，0.04mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，2min

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