多胺氧化酶(PAO)測試盒

多胺氧化酶(PAO)測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：                           

多胺氧化酶是催化生物體(ti) 內(nei) 多胺氧化的關(guan) 鍵酶，通過調節體(ti) 內(nei) 多胺水平和生成物的濃度，參與(yu) 各種植物體(ti) 對逆境脅迫的反應和生長發育過程。

測定原理：

PAO催化多胺氧化產(chan) 生過氧化氫，在過氧化物酶存在的條件下與(yu) 底物顯色，在550nm下有特征吸收峰，通過測定吸光值增加速率來反映PAO活性。

需自備的儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) 120mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體(ti) 3mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體(ti) 1.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體(ti) 1.5mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，然後10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後10000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

血清等液體(ti) ：直接測定。

測定步驟：

1. 酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至550nm。

2. 樣本測定

PAO活性計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A550變化0.001為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PAO（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位定義(yi) ：每g組織在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A550變化0.001為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PAO（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A550變化0.001為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PAO（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.001÷T =0.667×ΔA

4. 按液體(ti) 體(ti) 積計算

單位的定義(yi) ：每mL液體(ti) 樣本在每mL反應體(ti) 係中每分鍾A550變化0.001為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PAO（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.001÷T =333.33×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.2mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.02 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

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