多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒

多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一種細胞壁結合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與(yu) 果膠的降解，使細胞壁結構解體(ti) ，導致果實軟化，與(yu) 果實成熟、葉和花的脫落、病原物防禦，細胞伸展發育以及木質化有關(guan) ，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領域具有較高的研究價(jia) 值。

測定原理

多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與(yu) DNS試劑反應生成紅棕色物質，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 8mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃避光保存。

酶液提取

1．組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。16000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2．細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後16000g，4℃離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3．培養(yang) 液：直接檢測。

測定操作表

酶活性計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為(wei) 標準品濃度，mg/mL；y為(wei) 吸光值。

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PG活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3．按液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yang) 液每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PG活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

4. 按細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每104個(ge) 細胞每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細胞數量    

V反總：反應總體(ti) 積，0.15mL；V樣：反應中樣本體(ti) 積，0.03mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，0.5h

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x為(wei) 標準品濃度，mg/mL；y為(wei) 吸光值。

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

PG活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位（U）。

PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

3．按液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yang) 液每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位（U）。

PG活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)

4. 按細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：在40℃，pH6.0條件下，每104個(ge) 細胞每小時分解果膠酸產(chan) 生1mg半乳糖醛酸為(wei) 一個(ge) 酶活力單位（U）。

PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷細胞數量

V反總：反應總體(ti) 積，0.15mL；V樣：反應中樣本體(ti) 積，0.03mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，0.5h

注意事項

煮沸樣本建議將樣本在沸水中煮沸10分鍾，以將酶滅活。

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