詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,製藥/生物製藥 |
土壤亞(ya) 硝酸還原酶(SNiR)測試盒
微量法100T/48S
注意:正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。
測定意義(yi)
土壤亞(ya) 硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guan) 鍵酶之一,參與(yu) 亞(ya) 硝酸鹽至NO的還原反應,它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉化效率,為(wei) 氮素轉化規律的研究提供一定的依據。
測定原理
亞(ya) 硝酸還原酶可將NO2—還原為(wei) NO,使樣品中參與(yu) 重氮化反應生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反應土壤中亞(ya) 硝酸還原酶的活性。
需自備的儀(yi) 器和用品
天平、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、低溫離心機。
試劑的組成和配製
試劑一:液體(ti) 4mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨(lin) 用前加4mL蒸餾水溶解。
試劑三:液體(ti) 4mL×1瓶,4℃保存。(如出現沉澱可以70-80℃加熱溶解)
試劑四:液體(ti) 10mL×1瓶,4℃避光保存。(如出現沉澱可以70-80℃加熱溶解)
試劑五:液體(ti) 10mL×1瓶,4℃避光保存。
工作液:臨(lin) 用前根據用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。
樣品處理
新鮮土樣自然風幹或37度烘箱風幹,過30~50目篩。
測定操作表
空白管 | 對照管 | 測定管 | |
風幹土樣(g) | 0.02 | 0.02 | |
蒸餾水(μL) | 40 | ||
試劑一(μL) | 40 | 40 | |
試劑二(μL) | 40 | 40 | 40 |
混勻後,25℃反應1h | |||
試劑三(μL) | 40 | 40 | 40 |
充分震蕩30S,10000rpm,4℃,離心10min | |||
上清液(μL) | 70 | 70 | 70 |
工作液(μL) | 140 | 140 | 140 |
充分混勻,靜置3min後測定540nm處吸光值,分別記為(wei) A空白管、A對照管、A測定管。空白管隻要做一管,每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。 |
計算公式
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 1.5562x+ 0.0088,R2 = 0.996;x為(wei) 標準品濃度(μmol/mL),y為(wei) 吸光值(A標準管-A空白管)。
酶活單位定義(yi) :每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ 的量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。
S-NiR(μmol /d /g土樣)=[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷1.5562×V標÷W÷T
= 0.617×[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷W
T:反應時間,1h=1/24d;V標:標準液體(ti) 積,0.04mL;W:樣本質量,g。
b. 使用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.7781x+ 0.0088,R2 = 0.996;x為(wei) 標準品濃度(μmol/mL),y為(wei) 吸光值(A標準管-A空白管)。
酶活單位定義(yi) :每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ 的量為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。
S-NiR(μmol /d /g土樣)=[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷0.7781×V標÷W÷T
= 1.234×[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷W
T:反應時間,1h=1/24d;V標:標準液體(ti) 積,0.04mL; W:樣本質量,g。
注意事項
配製好的工作液3天內(nei) 使用完。
若吸光值超過1.5,將上清液進行適當的稀釋後再加入工作液顯色,並在計算公式中乘以稀釋倍數。
嚴(yan) 格控製顯色時間,否則會(hui) 對結果有影響。
標準曲線線性範圍為(wei) 0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
A空白管-(A測定管-A對照管)線性範圍為(wei) 0.02-1.5。
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