土壤亮氨酸氨基肽酶（SLAP）測試盒

土壤亮氨酸氨基肽酶（SLAP）測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：                           

S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為(wei) 亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與(yu) 機體(ti) 某些病理狀態密切相關(guan) 。

測定原理：

S-LAP分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，後者在405nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算S-LAP活性。

自備用品：

酶標儀(yi) /可見分光光度計、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

試劑一：液體(ti) 35mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

S-LAP測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至405nm，蒸餾水調零。

2. 在試劑二瓶中加入15mL試劑一充分溶解（如較難溶解，可60℃水浴加熱約30min促進溶解）；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

3. 操作表

混勻， 37℃振蕩反應1h後，8000g 4℃離心10min，取200μL上清液於(yu) 微量石英比色皿或96孔板中，405nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個(ge) 測定管設一個(ge) 對照管。

S-LAP活力單位的計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

單位的定義(yi) ：每天每g土樣每天生成1 μmol 對硝基苯胺定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，3×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光係數，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應時間，1h=1/24d； W：樣本質量，0.05g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

單位的定義(yi) ：每天每g土樣每天生成1 μmol 對硝基苯胺定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，3×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光係數，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；T：反應時間，1h=1/24d； W：樣本質量，0.05g。

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