乙酰膽堿酯酶（AchE）測試盒

乙酰膽堿酯酶（AchE）測試盒

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

AchE屬於(yu) 絲(si) 氨酸水解酶，廣泛存在於(yu) 各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿（Ach）水解，在神經傳(chuan) 導調節中起重要作用。

測定原理：

AchE催化Ach水解生成膽堿，膽堿與(yu) 二硫對硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過測定412 nm吸光度增加速率，計算AchE活性。

自備儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1支，4℃保存。臨(lin) 用前加入1.3 mL試劑二，充分震蕩溶解。

試劑四：粉劑×1支，4℃保存。臨(lin) 用前加入1.3 mL試劑二，充分震蕩溶解。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清液待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後8000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

血清等液體(ti) ：直接測定。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置於(yu) 37℃水浴中預熱30min。

3. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻，於(yu) 412nm處測定3min內(nei) 吸光值變化，第10s吸光值記為(wei) A1，第190s吸光值記為(wei) A2。△A測定管=A2-A1。

AchE活性計算：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

組織AchE活性

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（Cpr ×V樣）÷T

= 245×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義(yi) ：每克組織每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（W ×V樣÷V樣總）÷T

= 245×△A÷W

細菌、細胞AchE活性

活性單位定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T

= 245×△A÷細胞數量

血清AchE活性

活性單位定義(yi) ：每毫升血清每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷V樣÷T

=245×△A

ε：TNB摩爾消光係數，13.6×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積（L），200μL=2×10-4L；V樣總：提取液體(ti) 積，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入上清液體(ti) 積（mL），0.02 mL；W ：樣品質量；T：反應時間（min），3 min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

1. 組織AchE活性

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（Cpr ×V樣）÷T

= 490×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義(yi) ：每克組織每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（W ×V樣÷V樣總）÷T

= 490×△A÷W

2. 細菌、細胞AchE活性

活性單位定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T

= 490×△A÷細胞數量

3. 血清AchE活性

活性單位定義(yi) ：每毫升血清每分鍾催化產(chan) 生1nmol TNB的酶量為(wei) 1個(ge) 酶活單位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷V樣÷T

=490×△A

ε：TNB摩爾消光係數，13.6×103 L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積（L），200μL=2×10-4L；V樣總：提取液體(ti) 積，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入上清液體(ti) 積（mL），0.02 mL；W ：樣品質量；T：反應時間（min），3 min。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

乙酰膽堿酯酶（AchE）測試盒