一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測定試劑盒

一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測定試劑盒

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布於(yu) 生物體(ti) 內(nei) 神經、循環、呼吸、消化、泌尿生殖等係統中，特別是神經組織中較豐(feng) 富。它作為(wei) 細胞間及細胞內(nei) 的信息物質，發揮信號傳(chuan) 遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機體(ti) 的生理、病理過程中起著重要的作用。

測定原理：

NO在體(ti) 內(nei) 或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與(yu) 重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進一步與(yu) 萘基乙烯基二胺偶合，產(chan) 物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。

自備實驗用品及儀(yi) 器：

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)

樣品處理：

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後10000g，4℃，離心15min，取上清置於(yu) 冰上待測。

3. 體(ti) 液和培養(yang) 液等其它液態樣品：直接測定。

測定步驟和操作表：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至550nm。

2. 操作表

NO含量計算：

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為(wei) ：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本質量計算

NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）

3、其他樣品：

NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣

= 125×（ΔA +0.0103）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應中樣品體(ti) 積，0.1mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；W：樣品質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為(wei) ：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本重量計算

NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr

2、細胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）

3. 其他樣品：

NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V反總÷V樣= 250×（ΔA +0.0103）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應中樣品體(ti) 積，0.1mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；W：樣品質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

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