ATP含量試劑盒

ATP含量試劑盒

ATP廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細胞能量代謝狀態的主要參數。測定ATP含量並且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態。

測定原理：

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量，以此反應ATP含量。

自備儀(yi) 器和用品：

分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、可調式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

試劑組成和配製：

酸性提取液：液體(ti) 60mL×1瓶，4℃保存；

堿性提取液：液體(ti) 60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1支，4℃保存；臨(lin) 用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

試劑二：液體(ti) 1.5mL×1支，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

試劑四：液體(ti) 5mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：液體(ti) 25mL×1瓶，4℃保存；

標準液：液體(ti) 10mL×1瓶，2μmol/mLATP標準液，4℃保存；

 ATP提取：

1、血清（漿）中ATP的提取：按照血清（漿）體(ti) 積（mL）：酸性提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL酸性提取液），進行冰浴勻漿，8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體(ti) 積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用於(yu) 蛋白質含量測定）。

2、組織中ATP的提取：按照組織質量（g）：酸性提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液），進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中，加入等體(ti) 積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用於(yu) 蛋白質含量測定）。

3、細胞或細菌中ATP的提取：先收集細胞或細菌到離心管內(nei) ，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：酸性提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL酸性提取液），超聲波破碎1min（冰浴，強度20％或200W，超聲2s，停1s），8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體(ti) 積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用於(yu) 蛋白質含量測定）。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30 min以上，調節波長到700nm，蒸餾水調零。

2、顯色劑的配製：臨(lin) 用前請根據擬用顯色劑體(ti) 積（樣本數×0.2 m L），按試劑四(mL)：試劑五（mL）=1：5的比例配製。用多少配多少。

3、樣本測定：

充分混勻，37℃準確水浴30min

37℃水浴20min後，700nm下測定各管吸光值

注意：空白管和標準管通常隻需要各做一個(ge) 。每個(ge) 測定管設一個(ge) 對照管。

ATP含量計算：

1、血清（漿）中ATP含量計算

ATP含量(μmol/mL)=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)

2、組織、細菌或細胞中ATP含量計算

（1）按蛋白濃度計算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr）=2×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷Cpr

蛋白質含量需要另外測定。

（2）按樣本鮮重計算

ATP含量(μmol/g鮮重)=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=4×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

ATP含量(μmol/104 cell）=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.008×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)

C標準管：標準液濃度，2μmol/mL；V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.01mL；V2：加入提取液體(ti) 積，2mL；V3：加入血清（漿）體(ti) 積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) 。

注意：*低檢測限為(wei) 10nmol/mL或10nmol/g鮮重或0.1nmol/mg prot

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• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲(chu) 存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

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