腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性測定試劑盒

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在於(yu) 植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與(yu) ATP反應生成澱粉合成的直接前體(ti) ADPG，是植物澱粉生物合成的主要限速步驟。

測定原理

AGP催化的逆向反應生成G1P，在反應體(ti) 係中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測定NADPH增加速率，即可計算AGP活性。

需自備的的儀(yi) 器和用品

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體(ti) 20mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入9mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨(lin) 用前加入4mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融；

粗酶液製備 

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2、試劑一置30℃保溫10min以上。

3、在EP管中按順序加入下列試劑

混勻，30℃保溫15 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴迅速冷卻後，4000g4℃離心5min，取上清液，在96孔板中依次加入下列試劑

混勻後，立即於(yu) 340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min後的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。

AGP活性計算

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數

                =2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T×稀釋倍數

                =2813×ΔA÷W

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，2 min；稀釋倍數：1.75；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量。

b.使用96孔板測定的計算公式如下：

1、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

AGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數

                =5627×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T×稀釋倍數

                =5627×ΔA÷WV反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，2 min；稀釋倍數：1.75；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量。

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• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲(chu) 存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

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