ATP-檸檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）試劑盒

ATP-檸檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）試劑盒

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：                           

ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的關(guan) 鍵酶，其催化產(chan) 生的乙酰輔酶A可用於(yu) 脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質合成、氨基酸合成等。

測定原理：

ACL在ATP和輔酶A存在的情況下催化檸檬酸裂解為(wei) 乙酰輔酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm測定NADH減少速率，計算ACL活性。

需自備的儀(yi) 器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 20mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體(ti) 2μL×1支，4℃保存；

樣本的前處理：

1、細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2. 樣本測定

（1）工作液的配置，將試劑二和試劑三轉移至試劑一中，充分混合溶解，置於(yu) 37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；（注意：可取少量試劑一至試劑二和試劑三中，充分混勻溶解後轉移至試劑一瓶中，重複2-3遍）；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 2min20s後的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

ACL活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）ACL活力計算

單位定義(yi) ：每毫升血清（漿）每分鍾消耗1 nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1608×ΔA

2、組織、細菌或細胞中ACL活力計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾消耗1nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織每分鍾消耗1 nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1608×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細胞每分鍾消耗1 nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=3.216×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）ACL活力計算

單位定義(yi) ：每毫升血清（漿）每分鍾消耗1 nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3216×ΔA

2、組織、細菌或細胞中ACL活力計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾消耗1nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織每分鍾消耗1 nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=3216×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細胞每分鍾消耗1 nmol NADH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=6.432×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

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• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲(chu) 存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

• 
  

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甲泛葡胺/甲泛影酰胺/室椎影/阿米派克/造影胺/Metrizamide