6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒

6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒

G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guan) 鍵酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為(wei)  6 -磷酸葡萄糖酸內(nei) 酯，同時將NADP+還原為(wei) NADPH，供生物合成及維持細胞內(nei) 的還原狀態用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從(cong) 一定程度上反映出生物體(ti) 的生物合成和抗氧化能力。

測定原理：

G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340 nm下測定NADPH增加速率。

需自備的儀(yi) 器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存； 

試劑一：液體(ti) 19 mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；

樣本的前處理： 

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 1000~5000：1的比例（建議2000萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

G6PDH測定操作表：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2. 將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反複凍融。

3. 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑一，混勻後立即記錄340nm處1min後吸光值A1和 6min後的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

注意事項：若ΔA大於(yu) 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數。或將反應時間縮短至2min，使A2-A1小於(yu) 0.5，可提高檢測靈敏度。

G6PDH活力單位的計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）G6PDH活力的計算:

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾生成1 nmol的NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=643×ΔA

2、組織、細菌或細胞中G6PDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.3215×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；2000：細菌或細胞總數，2000萬(wan) 。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）G6PDH活力的計算:

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾生成1 nmol的NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1286×ΔA

2、組織、細菌或細胞中G6PDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷ (V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.643×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；2000：細菌或細胞總數，2000萬(wan) 。

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• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲(chu) 存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

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