4-香豆酸：輔酶A連接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL) 試劑盒

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4CL是連接苯丙酸途徑與(yu) 木質素特異合成途徑的關(guan) 鍵酶，主要催化肉桂酸生成相應的肉桂酸輔酶A酯，是合成木質素與(yu) 其他苯丙烷類化合物的代謝流向調控點。該酶主要存在於(yu) 高等植物、酵母和菌類中，研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理，為(wei) 減少水果石細胞含量而提高其品質提供依據。

測定原理：

4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，在333nm下測4-香豆酸CoA生成速率，即可反映4CL活性。

需自備的儀(yi) 器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 25 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存；

粗酶液提取：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 40℃預熱30min以上，調節波長至333nm，蒸餾水調零。

2. 準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板隻能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小於(yu) 340nm務必使用UV板）。

3. 樣本測定

（1）在試劑二中加入5mL試劑一充分溶解混勻，置於(yu) 40℃水浴預熱10min；現配現用（配好後24h內(nei) 用完）；

（2）對照管：在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL試劑一，混勻，立即記錄333nm處40℃反應30min後的吸光值A1。

（3）測定管：在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL試劑二，混勻，立即記錄333nm處40℃反應30min後的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。每個(ge) 測定管設一個(ge) 對照管。

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• 中文名稱：甲泛葡胺

• 英文名稱：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號：31112-62-6

  級別：Reagent Grade

• EINECS編號：250-475-5

• 儲(chu) 存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險：否

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