jenabiosescience:血液DNA製備-溶液試劑盒

Blood DNA Preparation - Solution Kit——基於(yu) 溶液從(cong) 全血中純化基因組DNA

Jena Biosescience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學家於(yu) 1998年成立，利用超過25年的學術知識為(wei) 100多個(ge) 國家的研究和行業(ye) 客戶開發創新試劑。

供一般實驗室使用。

運輸:在環境溫度下裝運

儲(chu) 存條件:在環境溫度下儲(chu) 存

保質期:12個(ge) 月

描述:
血液DNA製備試劑盒設計用於(yu) 從(cong) 全血樣品中方便快速地分離基因組DNA。基於(yu) 溶液的係統最大限度地減少了在基於(yu) 旋轉柱/過濾的方法中可能存在的DNA斷裂。因為(wei) 沒有使用苯酚或氯仿，所以它是安全的，並且不會(hui) 產(chan) 生任何有害的廢物。
基於(yu) 溶液的基因組DNA純化試劑盒保證了最小的DNA片段化，並產(chan) 生最大150 kb的DNA。

預期收益率:
基因組DNA的產(chan) 量因樣品而異，取決(jue) 於(yu) 加工材料的數量、質量和類型。大約的數量。每次製備300 μl全血，可獲得30-50 μg純化的DNA。如果需要更大量的DNA，將製備物放大10倍是容易的。

內(nei) 容:
紅細胞裂解液
細胞裂解液
蛋白質沉澱溶液
洗滌緩衝(chong) 液(使用前，按照瓶子上的指示添加96-99 %的乙醇)
DNA水合溶液

由您提供:
異丙醇(異丙醇)> 99 %
96-99 %乙醇
微管1.5或2.0毫升
65℃的加熱塊或水浴

準備程序:
開始前，提供> 99 %的異丙醇(2-丙醇)(不包括在套件中)。
對於(yu) S包(100包):將48毫升96-99 %的乙醇(不包含在試劑盒中)添加到清洗緩衝(chong) 瓶中。

1細胞裂解:

• 用移液管將900 μl紅細胞裂解液移至1.5 ml微管中，加入300 μl全血或骨髓，倒置10次。
• 在室溫下孵育3分鍾，偶爾倒置。請注意:對於製備前1小時內采集的新鮮血液，將孵育時間增加至10分鍾，以確保紅細胞*全溶解。
• 以15，000 g的速度離心30秒
• 用移液管移去上清液，留下可見的細胞沉澱。確保殘留液體不超過20 μl。這是後續步驟中有效蛋白質和DNA沉澱的關鍵點。
• 用力搖晃試管10秒鍾，使白細胞重新懸浮在殘留液體中。白細胞沉澱應該*全重新懸浮。
• 向重新懸浮的細胞中加入300 μl細胞裂解液，並上下吸取以裂解細胞，直到看不到團塊。
• 對於肝素處理的血液，在65°C下加熱白細胞沉澱10分鍾以促進溶解。

2蛋白質沉澱:

• 向細胞裂解液中加入100 μl蛋白質沉澱溶液。
• 劇烈渦旋20秒鍾以充分混合。應該可以看到沉澱蛋白質的微小顆粒(沒有結塊)。
• 以15，000 g離心1分鍾。
• 沉澱的蛋白質應該形成緊密的黑色顆粒。如果蛋白質沉澱不緊密，重複渦旋，然後在冰上孵育5分鍾，再次離心。

3 DNA沉澱:

• 用移液管將300 μl濃度大於99 %的異丙醇移入幹淨的1.5 ml微量管中，並加入上清液。
• 輕輕倒置1分鍾，混合樣品。
• 以15，000 g離心1分鍾。DNA應該是一個白色的小球。
• 在幹淨的吸水紙上簡單地丟棄上清液和引流管。
• 加入500 μl洗滌緩衝液，翻轉試管數次，以洗滌DNA沉澱。
• 以15，000 g離心1分鍾。
• 小心丟棄乙醇，並在室溫下幹燥約10至15分鍾。

4 DNA水合作用:

• 加入50-100 μl DNA水合溶液。
• 中速渦旋5秒鍾以混合。
• 將樣品在65°C下培養30分鍾，以加速複水。
• 將DNA儲存在4°C。對於長期儲存，將樣品放置在-20°C或-80°C

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