MagVigen™ FFPE DNA Extraction Kit

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產品內容

• mag vigen FFPE DNA捕獲納米顆粒
• 組織溶解緩衝液
• 蛋白酶K
• 蛋白酶K緩衝液
• 清洗緩衝液1原液
• 洗脫緩衝液

所需材料

• 異丙醇
• 乙醇
• 磁性架(NVIGEN目錄號A20006)

協議

• 注意:




• 使用您自己的方案去除FFPE樣本中的石蠟。
• 檢查組織溶解緩衝液，確保沒有沉澱。如果有，加熱到40°C使其溶解。

1. 製備清洗緩衝液1溶液:

   
   

   根據表1計算所需的清洗緩衝液1的量。向每500微升清洗緩衝液1儲備溶液中加入500微升異丙醇。




2. 製備蛋白酶K溶液:

   
   

   向裝有蛋白酶K的試管中加入蛋白酶K緩衝液。輕輕攪拌直至蛋白酶K溶解。將蛋白酶K溶液儲存在-20°C的冰箱中。




3. 向FFPE樣品中加入200μl或400μl的細胞溶解緩衝液。遵循表1中的試劑體積。




4. 向試管中加入準備好的蛋白酶K溶液，輕輕渦旋以充分混合，並在55°C下孵育30分鍾，冷卻至室溫。




5. 在80°C下孵育15分鍾，然後冷卻至室溫。




6. 向裂解緩衝液中加入MagVigen DNA捕獲納米顆粒。渦旋混合均勻。




7. 向裂解反應中加入異丙醇，渦旋混合

   
   

   在室溫下孵育45分鍾。




8. 將反應管放在磁架上沉澱珠子，直到溶液澄清(約10分鍾)。




9. 慢慢去除上層清液。注意不要拿走任何珠子，盡可能多地取出溶液。




10. 從磁鐵上取下試管，加入清洗緩衝液1。通過移液或渦旋混合。短暫旋轉，使溶液到達試管底部。在磁性架上沉澱珠子，直到溶液澄清(大約3分鍾)，然後取出溶液。




11. 加入洗滌緩衝液2 (80%乙醇)，通過移液混合。短暫旋轉，使溶液到達試管底部。在磁性架上沉澱珠子，等到溶液澄清後取出溶液。




12. 重複步驟11，用80%乙醇再清洗一次。




13. 將試管放在磁性架上，風幹顆粒約1分鍾。




14. 向珠子中加入所需量的洗脫緩衝液，上下吸取，直到所有沉澱全重新分散。




15. 將試管放在磁性支架上1分鍾。




16. 小心地從微量離心管底部收集上清液，不要擾動沉澱。上清液含有提取的DNA。

表1。每個(ge) 步驟中使用的試劑體(ti) 積。

MagVigen™ FFPE DNA Extraction Kit