澱粉分支酶（SBE）測試盒

澱粉分支酶（SBE）測試盒

微量法100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在於(yu) 植物中，是參與(yu) 支鏈澱粉合成的關(guan) 鍵酶，測定SBE活性在澱粉生物合成、優(you) 質農(nong) 作物品種選育和品質遺傳(chuan) 改良研究中具有重要意義(yi) 。

測定原理

直鏈澱粉和碘結合後在660nm有特征光吸收，SBE使直鏈澱粉含量減少，從(cong) 而降低了澱粉-碘複合物在660nm吸收值，一定時間內(nei) 吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

需自備的的儀(yi) 器和用品

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨(lin) 用前每支加入1mL蒸餾水，95℃沸水浴充分溶解後備用；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體(ti) 13mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體(ti) 1mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長到660 nm，蒸餾水調零。

2、加樣表

混勻，37℃準確保溫20 min，置95℃水浴中5 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻

混勻，室溫靜置10min，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，660nm處讀取各管吸光值。每個(ge) 測定管需設個(ge) 一個(ge) 對照管。

注意：

1、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然後集中進行5min 95℃沸水浴處理。2、試劑二如有沉澱，務必沸水浴溶解後使用。

SBE活力單位的計算

1、按照蛋白濃度計算

單位的定義(yi) ：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在反應體(ti) 係中每降低1％碘藍值為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

SBE活性(U/mg prot)=( A對照管-A測定管)/A對照管÷Cpr ×100

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義(yi) ：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每g組織在反應體(ti) 係中每降低1％碘藍值為(wei) 一個(ge) 酶活性單位。

SBE活性(U/g 鮮重)=(A對照管-A測定管)/A對照管÷(W÷V樣總)×100

V樣總：提取液總體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。

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