詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,製藥/生物製藥 |
糖原含量測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定
測定意義(yi) :
糖原是由葡萄糖單位構成的高分子多糖,是糖的主要的儲(chu) 存形式之一,主要貯存在肝和肌肉中作為(wei) 備用能量,分別稱為(wei) 肝糖原和肌糖原。肝糖原可調節血糖濃度,當血糖升高時可在肝髒合成糖原,血糖降低時,肝糖原則分解為(wei) 葡萄糖以補充血糖。因此,肝糖原對維持血糖的相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chu) 存形式,在劇烈運動消耗大量血糖時,肌糖原不能直接分解成血糖,必須先分解產(chan) 生乳酸,隨血液循環到肝髒,通過糖異生轉變為(wei) 肝糖原或葡萄糖。
測定原理:
蒽酮法。利用強堿性提取液提取糖原,在強酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。
需自備的儀(yi) 器和用品:
可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配製:
提取液:液體(ti) 100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:0.1mg/mL 的葡萄糖標準液 10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶, 4℃保存;
糖原提取:
1﹑細胞或細菌:收集500~1000萬(wan) 細菌或細胞到離心管內(nei) ,離心後棄上清;加入0.75mL提取液超聲波破碎細菌或細胞(功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重複30次);轉移至10mL試管中,95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;取出試管冷卻後,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。
2﹑組織:稱取0.1~0.2g樣品,加入0.75ml提取液充分勻漿;轉移至10ml試管中;95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;待組織全部溶解後,取出試管冷卻後,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上,調節波長至620nm,蒸餾水調零。
2、調節水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配製:在試劑二中倒入6mL蒸餾水,緩慢倒入24mL濃硫酸,充分溶解混勻後使用;用不完的試劑4℃保存一周;
4、加樣表(在EP管中反應):
試劑(μL) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
待測樣本 | 60 | ||
試劑一 | 60 | ||
蒸餾水 | 60 | ||
試劑二 | 240 | 240 | 240 |
混勻,置95℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,取200μL轉移至微量石英比色皿或96孔板中,於(yu) 620nm波長處,分別讀取空白管、標準管和測定管吸光度,分別記為(wei) A1、A2和A3。
注意:1、空白管和標準管隻要測一次。
如果A3-A1大於(yu) 2,需要將樣本用蒸餾水稀釋,計算公式中乘以相應稀釋倍數。
糖原含量的計算:
1、按照樣本質量計算
糖原(mg/mL)=1.11×(C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷(A2-A1)÷0.05
2、按照蛋白質含量計算
糖原(mg/mg prot)=1.11×(C標準×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷Cpr
1.11:是此法測得葡萄糖含量換算為(wei) 糖原含量的常數,即111ug糖原用蒽酮試劑顯色相當於(yu) 100ug葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色;C標準管:標準管濃度,0.1mg/mL;V1:加入反應體(ti) 係中待測樣本體(ti) 積,0.06mL;V2:加入提取液體(ti) 積,5mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
注意:*低檢測限為(wei) 10ng/g鮮重或0.1ng/ mg prot。
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