銅藍蛋白（Cp）含量測試盒

銅藍蛋白（Cp）含量測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) :

銅藍蛋白是血漿的含銅蛋白，有運輸銅的功能，同時具有氧化酶的活性，是細胞外液重要的抗氧化劑。

測定原理:

銅藍蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺生成藍色產(chan) 物，在645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍蛋白活性。

自備實驗用品及儀(yi) 器:

天平、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配製:

試劑一：液體(ti) 10mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 7mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃預熱）

樣本前處理：

1. 血清（漿）等液體(ti) 樣本：直接檢測。

2. 動植物組織樣本：稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水，進行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定操作表:

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至645nm，蒸餾水調零。

2. 操作表

計算公式:

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 按體(ti) 積計算

酶活定義(yi) :37℃條件下， 每分鍾每毫升樣品與(yu) 底物作用吸光度升高0.01為(wei) 一個(ge) 酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.01÷V樣÷T = 33.33×ΔA

2. 按鮮重計算

單位定義(yi) ：37℃條件下，每分鍾每克樣品與(yu) 底物作用吸光值升高0.01為(wei) 一個(ge) 酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.01÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 33.33×ΔA÷W

3. 按蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：37℃條件下，每分鍾每毫克蛋白樣品與(yu) 底物作用吸光值升高0.01為(wei) 一個(ge) 酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.01÷（Cpr×V樣）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應時間，30min；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

2. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 按體(ti) 積計算

酶活定義(yi) :37℃條件下， 每分鍾每毫升樣品與(yu) 底物作用吸光度升高0.005為(wei) 一個(ge) 酶活單位。

Cp活力（U/mL）=ΔA×V反總÷0.005÷V樣÷T = 66.66×ΔA

2. 按鮮重計算

單位定義(yi) ：37℃條件下，每分鍾每克樣品與(yu) 底物作用吸光值升高0.005為(wei) 一個(ge) 酶活單位。

Cp活力（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷0.005÷（W×V樣÷V樣總）÷T = 66.66×ΔA÷W

3. 按蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：37℃條件下，每分鍾每毫克蛋白樣品與(yu) 底物作用吸光值升高0.005為(wei) 一個(ge) 酶活單位。

Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反總÷0.005÷（Cpr×V樣）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V樣：0.03 mL；V反總：0.3 mL；T：反應時間，30min；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意事項:

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請操作時做好防護措施。

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