超氧陰離子清除能力測試盒

超氧陰離子清除能力測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

超氧陰離子自由基作為(wei) 生物體(ti) 代謝過程中產(chan) 生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質、蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細胞結構和功能的破壞，與(yu) 機體(ti) 衰老和病變有很密切的關(guan) 係，清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關(guan) 注。

測定原理

AP-TEMED係統產(chan) 生超氧陰離子，與(yu) 鹽酸羥胺反應生成NO2－，NO2－與(yu) 對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與(yu) 530nm的吸光值呈負相關(guan) 。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 1.5mL×1支，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨(lin) 用前加6mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體(ti) 7.5mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 7.5mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體(ti) 7.5mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理

組織：按照質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿後於(yu) 4℃，10000g離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後4℃，10000g離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

培養(yang) 液或其它液體(ti) ：直接檢測。

粉劑藥物可配製成相同濃度，比如1mg/mL。

測定操作

注意：對照管隻需測定一次。

計算公式

超氧陰離子清除率 I%=

注意事項

1. 試劑一4℃可保存2個(ge) 月，配製好的試劑二4℃可保存一周，建議實驗前配製，並盡快使用。

2. 樣品處理完後立即進行測定，或者低溫保存不超過24小時。

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