丙氨酸氨基轉氨酶（GPT/ALT)測試盒

穀丙轉氨酶/丙氨酸氨基轉氨酶（GPT/ALT)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，催化氨基酸和酮酸轉氨基反應，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動物肝細胞GPT活性很高，當肝細胞壞死，GPT釋放到血液中，血清GPT活性顯著增高。因此，GPT被世界衛生組織推薦為(wei) 肝功能損害最敏感的檢測指標。

測定原理

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸發生轉氨基反應，生成丙酮酸和穀氨酸；加入2,4-二硝*苯肼溶液，不僅(jin) 終止上述反應，而且與(yu) 酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下呈紅棕色，可以在505nm讀取吸光值並計算酶活力。

試驗中所需的儀(yi) 器和用品

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配製

提取液：60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體(ti) 2.5 mL×1瓶， 4℃保存； 

試劑二：液體(ti) 2.5 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑三：液體(ti) 25 mL×1瓶，4℃保存；

樣品測定的準備

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至505nm，蒸餾水調零。

2. 在EP管或在96孔板中加入下列試劑

混勻後，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確反應20min

混勻後，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確反應20min

混勻，室溫（25℃）放置10min，在505nm波長處測各管吸光度A。ΔA=A測定管-A對照管。每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。

計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.4228x+0.0003   (x為(wei) 標準品濃度，umol/mL；y為(wei) ΔA)。

2、血清（漿）GPT活力的計算

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾催化產(chan) 生1nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0003）÷0.4228÷T×103=118.26×（ΔA-0.0003）

3、細胞、細菌和組織中GPT活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1 nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =118.26×（ΔA-0.0003）÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =118.26×（ΔA-0.0003）÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾催化產(chan) 生1nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.236×（ΔA-0.0003）

V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.01mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，20min；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) ；103：1umol/mL=103 nmol/mL。

b.使用96孔板測定的計算公式如下：

1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.2114x+0.0003   (x為(wei) 標準品濃度，umol/mL；y為(wei) ΔA)。

2、血清（漿）GPT活力的計算

單位的定義(yi) ：每mL血清（漿）每分鍾催化產(chan) 生1nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0003）÷0.2114÷T×103=236.5×（ΔA-0.0003）

3、細胞、細菌和組織中GPT活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1 nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =236.5×（ΔA-0.0003）÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =236.5×（ΔA-0.0003）÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾催化產(chan) 生1nmol丙酮酸定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

GPT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.473×（ΔA-0.0003）

V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.01mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，20 min；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬(wan) ；103：1umol/mL=103 nmol/mL。

1. 標準曲線線性範圍為(wei) ：0.01 umol/mL -2 umol/mL。

2. ΔA線性範圍為(wei) ：0.01 -1。

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