肝脂酶（HL）測試盒

肝脂酶（HL）測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實質細胞中合成，存在於(yu) 肝髒竇周間隙內(nei) 皮細胞表麵和竇周間隙腔麵的肝細胞微絨毛表麵，可促進脂蛋白中的膽固醇向類固醇激素轉化，血漿中的HL活性增高時，血漿中小顆粒可導致LDL水平升高，加速動脈粥樣硬化的發生。

測定原理

肝酯酶水解α-乙酸萘酯產(chan) 生α-萘酚，可與(yu) 固藍B鹽形成紫紅色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，顏色深淺在一定範圍內(nei) 與(yu) 肝酯酶活性成正相關(guan) 。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配製    

試劑一：液體(ti) 110mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 1mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體(ti) 8mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 1mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理

1. 組織：按照質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿後於(yu) 4℃，10000g離心10min，取上清待測。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後於(yu) 4℃，10000g離心10min，取上清待測。

3. 血清：直接測定。

測定操作

計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克組織每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HL活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

                                      = 6.58×（△A+0.1241）÷細胞數量

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每毫升血清每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。HL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷V樣÷T

                                = 6.58×（△A+0.1241）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應體(ti) 係中加入樣本體(ti) 積，0.02mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；T：反應時間，10min

b．用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.076 x -0.1241，R2=0.9994

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義(yi) ：每毫克蛋白每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

酶活性定義(yi) ：每克組織每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HL活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷W

3．按照細胞數量計算

酶活性定義(yi) ：每104個(ge) 細胞每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T

                                      = 13.16×（△A+0.1241）÷細胞數量

4．按照液體(ti) 體(ti) 積計算

酶活性定義(yi) ：每毫升血清每分鍾水解α-乙酸萘酯產(chan) 生1μmol α-萘酚為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。HL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.076×V反總÷V樣÷T

                                = 13.16×（△A+0.1241）

V反總：反應總體(ti) 積，0.2mL；V樣：反應體(ti) 係中加入樣本體(ti) 積，0.02mL；W：樣本質量，g；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；T：反應時間，10min

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