考馬斯亮藍法蛋白含量測試盒

考馬斯亮藍法蛋白含量測試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

樣品可溶性蛋白質含量常常用於(yu) 酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用於(yu) 食品等質量分析。

測定原理：

在酸性溶液中，考馬斯亮藍G-250與(yu) 蛋白質結合形成藍色複合物；該複合物在620nm處有最大吸收峰， 其顏色的深淺與(yu) 蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。

自備儀(yi) 器和用品：

離心機、酶標儀(yi) 、96孔板、移液器和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) 11 mL×1瓶，4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質提取：

1. 液體(ti) 樣品：澄清液體(ti) 樣品可以直接測定。

2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：20的比例（建議稱取約0.05 g組織，加入1mL提取液（自備，根據需要選用酶提取緩衝(chong) 液或者蒸餾水或者生理鹽水））

冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後8000g，4℃，離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

測定操作：

1. 酶標儀(yi) 預熱30 min。

2. 在96孔板中加入：

注意：空白管隻需要測定一次。

計算公式：

標準曲線：y = 7.1265x - 0.0007  R2 = 0.9997    x: 蛋白標準品濃度(mg/mL)

                                                 y: 吸光值差值

1.按液體(ti) 樣本體(ti) 積計算：

Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷7.1265

                                 =0.1403×(△A+0.0007)

2.按組織樣本質量計算：

                    Cpr（mg/g）=(△A+0.0007)÷7.1265×V總÷W            

=0.1403×(△A+0.0007)÷W

V總：提取液體(ti) 積，1 mL; W：樣本質量，g。

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