總巰基測試盒

總巰基測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

生物體(ti) 內(nei) 巰基主要包括穀胱甘肽巰基和蛋白質巰基。前者不僅(jin) 能夠修複氧化損傷(shang) 的蛋白質，而且參與(yu) 活性氧清除，後者對於(yu) 維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和GSH含量，能夠間接測定蛋白質巰基含量。

測定原理：

巰基基團與(yu) 5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。

自備實驗用品：

天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標儀(yi) 、96孔板、乙醇和蒸餾水。

試劑組成和配製： 

試劑一：液體(ti) 18mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 1mL×1管，4℃避光保存。 

樣品的製備：

1. 按照組織質量（g）：水體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水）進行冰浴勻漿，然後8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清，培養(yang) 液：稀釋5倍後測定，可取0.1mL樣本，加入0.4mL蒸餾水，混勻，置冰上待測。

操作步驟：

1. 酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長至412nm。

2. 操作表

在96孔板中加入如下試劑

計算公式：

總巰基標準曲線：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x為(wei) 標品濃度，單位μmol/mL，y為(wei) 吸光度ΔA。

1. 組織：

（1）按樣本重量計算

總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷W

=0.552×（ΔA+0.0037）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷Cpr

=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr

2. 血清、培養(yang) 液：

總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103

=2761×（ΔA+0.0037）

V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；5：血清，培養(yang) 液等液體(ti) 樣本稀釋倍數；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L

注意事項

*低檢出限為(wei) 10μmol/L。

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