尿素氮測試盒

尿素氮測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

尿素是生物體(ti) 內(nei) 含氮化合物分解的終產(chan) 物，在尿酶催化下分解轉化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標之一。

測定原理

樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與(yu) 二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一種紅色的二嗪化合物，其顏色的深淺與(yu) 尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法測定尿素氮含量。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配製    

試劑一：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃避光保存，

試劑二：液體(ti) 60mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理

組織：按照質量（g）：蒸餾水體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，勻漿後於(yu) 25℃，10000g離心10min，取上清待測。

細胞：按照細胞數量（104個(ge) ）：蒸餾水體(ti) 積（mL ）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL蒸餾水），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然後4℃，10000g離心10min，取上清置於(yu) 冰上待測。

血清或其它液體(ti) ：直接檢測。

測定操作

混勻，沸水浴10min，冷卻後，540nm下測定吸光值。△A=A測定-A空白。空白管隻要做一管。

尿素氮含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為(wei) y =2.048x + 0.0229，R2 = 0.9943；x為(wei) 標準品濃度（mg/mL），y為(wei) 吸光值。

1、按照血清（漿）或者細胞培養(yang) 液體(ti) 積計算

尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)

2、按照樣本質量計算

尿素氮含量mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷2.048×V樣總÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr

V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 1.024x + 0.0229，R2 = 0.9943； x為(wei) 標準品濃度（mg/mL），y為(wei) 吸光值。

1、按照血清（漿）或者細胞培養(yang) 液體(ti) 積計算

尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷1.024=0.9766×(△A-0.0229)

2、按照樣本質量計算

尿素氮含量(mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷1.024×V樣總÷W=0.9766×(△A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.9776×(△A-0.0229) ÷Cpr

V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

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