土壤羥胺還原酶（HR）測試盒

土壤羥胺還原酶（HR）測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產(chan) 物羥胺還原為(wei) 氨，土壤中的還原態化合物可作為(wei) 氫的供體(ti) ，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發損失，間接影響氮肥的利用效率。

測定原理

硫酸鐵銨中的Fe3+可將羥胺氧化為(wei) 氮氣，自身被還原為(wei) Fe2+，Fe2+在弱酸條件下與(yu) 鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，羥胺還原酶作用於(yu) 羥胺，使配合物形成量減少，510nm處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀(yi) 、氮吹儀(yi) 。

試劑組成和配製

試劑一：液體(ti) 4mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨(lin) 用前加4mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體(ti) 12mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 8mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：液體(ti) 4mL×1瓶，4℃保存。

試劑六：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑七：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理

 新鮮土樣自然風幹或 37 度烘箱風幹，過 30~50 目篩。

測定操作表

計算公式

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.185x -0.1828，R2 = 0.9992

酶活定義(yi) ：每克土壤每天轉化1μg羥胺為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HR活性（μg/d /g土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.185×V反總÷W÷T

                 = 36.32×（△A+0.1828）÷W

b. 使用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0925x -0.1828，R2 = 0.9992

酶活定義(yi) ：每克土壤每天轉化1μg羥胺為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HR活性（μg/d /g土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.0925×V反總÷W÷T

                 =72.64×（△A+0.1828）÷W

V反總：加入提取液體(ti) 積，0.28mL；W：樣本質量，g；T：1/24h
注意事項

1. 土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層5cm以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

2. 試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。

3. 反應體(ti) 係最好能用氮吹儀(yi) 排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三後立即密封，於(yu) 30℃反應1h。

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