土壤外切β1，4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（SC1）測試盒

土壤外切β1，4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（SC1）測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

C1（EC3.2.1.91）存在於(yu) 細菌、真菌和動物體(ti) 內(nei) ，是纖維素酶係的組份之一，C1催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測定原理：

采用3,5－二硝基水楊酸法測定S-C1催化微晶纖維素降解產(chan) 生的還原糖的含量。

需自備的儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) /可見分光光度計、水浴鍋、離心機、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體(ti) 25mL×1瓶，4℃保存；

樣品測定的準備： 

稱取約0.1g新鮮土樣或風幹土樣，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，室溫振蕩提取30min，然後10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至540nm，蒸餾水調零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，37℃準確水浴2h

混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻後，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，測540nm下吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。

S-C1活性計算

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 6.4078x - 0.0673；x為(wei) 標準品濃度（mg/mL），y為(wei) 吸光值。

單位的定義(yi) ：每g土樣每分鍾催化產(chan) 生1μg 葡萄糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.11mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，120 min； W：樣本質量，g；

 b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為(wei) y = 3.2039x - 0.0673；x為(wei) 標準品濃度（mg/mL），y為(wei) 吸光值。

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1μg 葡萄糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.11mL； V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，120 min； W：樣本質量，g。

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