半胱氨酸（Cys）含量測試盒

半胱氨酸（Cys）含量測試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi) ：

蛋白質含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是一種含有巰基的含硫氨基酸，從(cong) 甲硫氨酸轉化而來，並且可與(yu) 胱氨酸互相轉化。Cys參與(yu) 蛋白質二硫鍵的形成，經常是蛋白質活性中心的組成部分，還可以為(wei) 其它生理生化反應提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表麵，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，並且補充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調節表皮最下層的色素細胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和過敏性皮膚等作用。

測定原理：

Cys還原磷鎢酸生成鎢藍，在600nm處有吸收峰；通過600nm吸光度，計算Cys含量。

自備儀(yi) 器和用品：

低溫離心機、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、85％磷酸和蒸餾水。

試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。用前1天，向試劑三中加2.5mL蒸餾水充分溶解，再加85％磷酸0.625mL，混勻後蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h；冷卻後加10mL蒸餾水，4℃可保存2周。

標準品：粉劑×1瓶，臨(lin) 用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。用不完的試劑4℃可保存3天。

半胱氨酸提取：

1. 液體(ti) 樣品中半胱氨酸提取：取0.1mL液體(ti) 樣品，加試劑一0.9mL，充分混勻，8000g

4℃離心10min，取上清液，待測。

2. 組織中半胱氨酸提取：按照組織質量（g）：試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10 min，取上清液待測。

3. 細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：試劑一體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到600 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻後室溫靜置15 min，於(yu) 600nm處測定吸光值，記為(wei) A空白管。

3. 標準管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL標準液，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻後室溫靜置15 min，於(yu) 600nm處測定吸光值，記為(wei) A標準管。

4. 測定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻後室溫靜置15 min，於(yu) 600nm處測定吸光值，記為(wei) A測定管。

注意：空白管和標準管隻需要做一次。

計算公式：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 按液體(ti) 樣品的體(ti) 積計算：

半胱氨酸含量（μmol/mL）=[C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

2. 按樣本質量計算：

半胱氨酸含量（μmol/g 鮮重）=[C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）÷W=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷W

3. 按照蛋白濃度計算：

半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]÷（V樣×Cpr）=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷Cpr

4. 按細胞數量計算：

氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)] ×（V樣總÷V樣×細胞數量）=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷細胞數量

C標準品：標準品濃度，1 μmol/mL；V標準品：反應體(ti) 係中加入標準品體(ti) 積，0.02mL；V樣：反應體(ti) 係中加入樣品提取液體(ti) 積，0.02 mL；V樣總：樣品提取液，1mL；W：樣品質量，g。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

1. 按液體(ti) 樣品的體(ti) 積計算：

半胱氨酸含量（μmol/mL）=[C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

2. 按質量計算：

半胱氨酸含量（μmol/g 鮮重）=[C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）÷W=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷W

3. 按照蛋白濃度計算：

半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]÷（V樣×Cpr）=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷Cpr

4. 按細胞數量計算：

氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C標準品×V標準品×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)] ×（V樣總÷V樣×細胞數量）=1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷細胞數量

C標準品：標準品濃度，1 μmol/mL；V標準品：反應體(ti) 係中加入標準品體(ti) 積，0.02mL；V樣：反應體(ti) 係中加入樣品提取液體(ti) 積，0.02 mL；V樣總：樣品提取液，1mL；W：樣品質量，g。

注意事項：

*低檢出限為(wei) 100μmol/L。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

半胱氨酸（Cys）含量測試盒