半胱氨酰亞碸裂解酶（CSL)測試盒

半胱氨酰亞(ya) 碸裂解酶（CSL)測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

測定意義(yi)

半胱氨酰亞(ya) 碸裂解酶（CSL）廣泛存在於(yu) 百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥)，十字花科芸薹屬

(如卷心菜，菜花，西蘭(lan) 花)，以及豆科中的合金歡屬中，並通常被稱為(wei) 蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-穀氨酰轉肽酶和半胱氨酸亞(ya) 碸裂解酶的作用下轉化成香菇精，以及產(chan) 生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是內(nei) 源性甲醛生成的關(guan) 鍵酶之一，測定CSL活性對於(yu) 研究食品安全具有重要意義(yi) 。

測定原理

CSL催化S-甲基-L-半胱氨酸亞(ya) 碸反應產(chan) 生丙酮酸，與(yu) 2,4-二硝*苯肼反應，在堿性條件下顯棕紅色，在510nm下有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀(yi) 器

天平、研缽、離心機、酶標儀(yi) 、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

試劑組成和配製 

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨(lin) 用前加入2mL水溶解，用不完的試劑分裝後-20℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存，臨(lin) 用前加入10mL水溶解，用不完的試劑分裝後-20℃保存；

試劑三：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體(ti) 30mL×1瓶，4℃保存。

樣本處理

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，4℃浸提40min。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。            

測定操作

計算公式

標準曲線：y = 0.7313x + 0.0027，R2 = 0.9993；x為(wei) 標準品濃度：μmol/mL；y為(wei) 吸光度△A

1. 按蛋白含量計算

C-S lyase活性（μmol/min/mg prot）=（△A -0.0027）÷ 0.7313×V樣÷(V樣×Cpr )÷T

                    =0.068×（△A-0.0027）÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

C-S lyase活性（μmol/min/g 鮮重）=（△A -0.0027）÷ 0.7313×V樣÷(V樣÷V樣總×W )÷T

                    =0.068×（△A-0.0027）÷ W

V樣，加入樣本上清體(ti) 積，0.05mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T，反應時間，20min。

注意事項

1. 若測定結果中吸光值超過1，請將樣本稀釋後進行測定，並在計算公式中乘以稀釋倍數。香菇類樣本活性較大，可能需要稀釋80-100倍。

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半胱氨酰亞(ya) 碸裂解酶（CSL)測試盒