共價結合型果膠（CSP）含量測試盒

共價(jia) 結合型果膠（CSP）含量測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

果膠是構成細胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細胞壁中含量豐(feng) 富的多糖成分，其特*的物理、化學性質影響著植物源食品的口感和品質。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環偶聯的方式交聯，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結合型果膠（ISP）和共價(jia) 結合果膠（CSP）。

測定原理：

利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價(jia) 結合型果膠（CSP），采用哢唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與(yu) 哢唑試劑進行縮合反應，生成物質在530 nm處有最大吸收峰。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80％乙醇、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

試劑一：液體(ti) 100mL× 1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) 100mL× 1瓶，4℃保存。

試劑三：標準液1mL× 1支，4℃保存。

試劑四：液體(ti) 5mL× 1瓶，4℃保存；

樣品的前處理： 

1. 細胞壁的提取：取約0.3g樣本，加入1mL 80％乙醇，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉澱加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉澱即為(wei) 粗細胞壁，加入1mL試劑一（去除澱粉）浸泡15小時，4000g 25℃離心10min，棄上清，將沉澱幹燥，稱重得細胞壁物質（CWM）。

2. CSP的提取：稱取烘幹的CWM 3mg，加入1mL試劑二，充分勻漿(若烘幹物質質地堅硬，可先研碎後再加入1mL試劑二勻漿，或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min，取上清液待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至530nm處，蒸餾水調零；試劑三和試劑四37℃預熱10min以上；

2、操作表：

  混勻  

混勻，95℃水浴5min後，冷卻至室溫，取200µL 至微量石英比色皿或96孔板中，530nm處讀取吸光值，空白管、標準管、對照管和測定管吸光值分別記為(wei) A1、A2、A3和A4。若A大於(yu) 2，需將待測樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋10倍或20倍）。空白管和標準管隻要做一管，每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。

CSP含量計算：

CSP含量(mg /g 幹重)= (C標準×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數

C標準：標準管濃度，0.05mg/mL；V1：加入樣本體(ti) 積，0.1mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1mL； W：樣本幹重，g。

注意：*低檢測限為(wei) 50μg /g 幹重 

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