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亞鐵氧化酶(HP)測試盒

簡要描述:亞(ya) 鐵氧化酶(HP)測試盒 亞(ya) 鐵氧化酶(Hephaestin,HP)試劑盒 paybet雷竞技專(zhuan) 業(ye) 實驗室產(chan) 品.為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求,提供方便、快捷的服務。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-06
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詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,製藥/生物製藥

亞(ya) 鐵氧化酶(HP)測試盒


微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) :

Hephaestin (HP)作為(wei) 銅藍蛋白的同係物,是近年來發現的鐵轉運蛋白亞(ya) 鐵氧化酶,HP屬亞(ya) 鐵氧化酶家族成員,具有亞(ya) 鐵氧化酶的活性,參與(yu) 體(ti) 內(nei) 鐵代謝。HP的表達可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調節。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介導鐵的跨膜轉運中有重要作用。

測定原理

HP催化Fe2+氧化為(wei) Fe3+,Fe2+和ferrozine反應顯色,在560 nm下有特征吸光值。通過測定Fe2+的減少速率可測得亞(ya) 鐵氧化酶的活性。

自備用品:

酶標儀(yi) 、台式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配製:

試劑一:液體(ti) 60 mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體(ti) 1.5 mL×1瓶,4℃保存;

試劑三:液體(ti) 11 mL×1瓶,4℃避光保存。

粗酶液提取:

按照組織質量(g):水(mL)為(wei) 1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

  1. 酶標儀(yi) 預熱30 min以上,調節波長至560 nm。

2. 在96孔板中加入下列試劑

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

試劑一

50

50

試劑二

10

10

樣本

10

10

蒸餾水

30

30

試劑三

混勻,40℃靜置30 min

100

試劑三

100


混勻,立即測定A對照和A測定,ΔA=A對照-A測定。(每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管)

HP活性計算:

標準曲線:y = 8.2135x - 0.0006,R2 = 0.9998;(x為(wei) 標準品濃度,μmol/mL;y為(wei) 吸光值ΔA)

  1. 按樣本質量計算

單位定義(yi) :每g樣本每分鍾氧化1nmol Fe2+定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HP(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0006)÷ 8.2135×V總÷T ÷(W× V樣÷V樣總)× 1000

= 40.58×(△A+0.0006)÷W

(2)按樣本蛋白濃度計算

單位定義(yi) :每mg蛋白每分鍾氧化1nmol Fe2+定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

HP(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0006)÷ 8.2135×V總÷T ÷(Cpr×V樣)

= 40.58×(△A+0.0006)÷Cpr

V總:反應體(ti) 係體(ti) 積,0.1 mL;V樣:加入樣本體(ti) 積0.01 mL;V樣總:加入提取液體(ti) 積,1 mL;T:反應時間,30min;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;1000,μmol到nmol的轉換係數。





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