乙酰輔酶A羧化酶（ACC）測試盒

乙酰輔酶A羧化酶（ACC）測試盒

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

ACC在生物體(ti) 內(nei) 催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A，是脂肪酸和許多次生代謝產(chan) 物合成的關(guan) 鍵酶。ACC的活性在一定程度上決(jue) 定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

測定原理

ACC能夠催化乙酰輔酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰輔酶A、ATP和無機磷，通過鉬酸銨定磷法測定無機磷的增加量來測定ACC活性。

需自備的儀(yi) 器和用品

分光光度計/酶標儀(yi) 、恒溫水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：10mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入25mL蒸餾水，溶解後4℃可保存一周。

試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL蒸餾水，溶解後4℃可保存一周。

試劑六：液體(ti)  25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑七：10μmol/mL 標準磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

樣本的前處理

1、細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至660nm，蒸餾水調零。

2. 酶促反應試劑的配製和預熱：在試劑二瓶中加入2.5mL試劑一，充分溶解混勻；在試劑三瓶中加入2mL蒸餾水，充分溶解混勻；將試劑一、二、三在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鍾。

3、定磷試劑的配製：按H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配製，配好的定磷試劑

              應為(wei) 淺黃色，若無色則試劑失效，若是藍色則為(wei) 磷汙染，定磷劑現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷汙染。

4、0.5μmol/mL 標準磷應用液配製：將試劑七20倍稀釋，即取 0.5mL試劑七加9.5蒸餾水，充分混勻。

5、酶促反應

37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確反應30min後，90℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻後，10000g 25℃離心5min，取上清

6、定磷

混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）保溫30min，冷卻至室溫，在 660nm處，蒸餾水調零，記錄各管吸光值A。標準管、空白管隻要做一次即可，每個(ge) 測定管需要設一個(ge) 對照管。

注意：若測定管吸光值大於(yu) 2，將樣品用提取液稀釋適當倍數後再進行測定，使吸光值小於(yu) 2，可提高檢測靈敏度，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

ACC活性計算： 

1、按組織蛋白濃度計算：

定義(yi) ：每小時每毫克組織蛋白產(chan) 生1μmol無機磷的量為(wei) 一個(ge)  ACC活力單位。

ACC (μmol/h/mg prot)=(C標準管×V總)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷

(V樣×Cpr)÷T=10×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算： 

定義(yi) ：每小時每g組織產(chan) 生1μmol無機磷的量為(wei) 一個(ge)  ACC活力單位。

ACC (μmol/h /g鮮重)=(C標準管×V總)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管）×V總÷

(W× V樣÷V樣總)÷T=10×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W

3. 按細菌或細胞密度計算：

定義(yi) ：每小時每500萬(wan) 細菌或細胞產(chan) 生1μmol無機磷的量為(wei) 一個(ge)  ACC活力單位。

ACC (U/104 cell)=(C標準管×V總)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管）×V總÷

(500× V樣÷V樣總)÷T=0.02×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)

C標準管：標準管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應總體(ti) 積，0.1mL；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01mL ；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；T：反應時間，0.5小時；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

乙酰輔酶A羧化酶（ACC）測試盒