β葡萄糖醛酸苷酶（βGD）測試盒

β葡萄糖醛酸苷酶（βGD）測試盒

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

β-GD廣泛存在於(yu) 動物組織中，是一種參與(yu) 腫瘤侵襲和轉移過程的基質降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐(feng) 富，測定胃液β-GD活性對於(yu) 研究胃癌具有重要的意義(yi) 。

測定原理

β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產(chan) 生遊離的酚酞，通過測定苯酚含量反應該酶活性高低。

需自備的儀(yi) 器和用品

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 2mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨(lin) 用前加入2mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑三：液體(ti) 15mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：1μmol/mL標準儲(chu) 備液10mL，4℃保存；

樣品測定的前處理

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至540nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定

混勻後，37℃反應30min

混勻， 540nm下測定各管吸光值

注意：標準管和空白管隻需測一次。

β-GD活性計算

（1）按樣本鮮重計算：

單位定義(yi) ：每小時每g鮮重樣品中催化產(chan) 生 1μmol酚酞的量為(wei) 一個(ge) 活力單位。

β-GD（μmol/h/g 鮮重）= (C標準管×V1)×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義(yi) ：每小時每mg組織蛋白催化產(chan) 生 1μmol酚酞的量為(wei) 一個(ge) 活力單位。

β-GD（μmol/h/mg prot）= (C標準管×V1)×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷(V1×Cpr)÷T=2×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr

C標準管：標準管濃度， 1μmol/mL；V1：加入樣本體(ti) 積：0.01mL；V2：加入提取液體(ti) 積，1mL；T：反應時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

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