NADP-蘋果酸酶（Malic enzyme，NADP-ME）試劑盒

NADP-蘋果酸酶（Malic enzyme，NADP-ME）試劑盒

正式測定前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

ME廣泛存在於(yu) 微生物、培養(yang) 細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產(chan) 生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝的關(guan) 鍵酶。ME活性與(yu) 生物合成和抗氧化密切相關(guan) 。近年來植物ME活性測定較多，已經成為(wei) 抗氧化研究的熱點。根據輔酶專(zhuan) 一性和對底物特異性的不同，可將ME分為(wei) NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測定原理：

NADP-ME催化NADP+還原成NADPH，在340nm下測定NADPH增加速率。

需自備的儀(yi) 器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配製：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存。；

試劑一：液體(ti) 30mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存； 臨(lin) 用前加入20mL試劑一充分振蕩，溶解待用，用不完的試劑分裝後-20度保存，禁止反複凍融。

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨(lin) 用前加入2.5mL蒸餾水充分振蕩，溶解待用，用不完的試劑分裝後-20度保存，禁止反複凍融。

樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的製備：

細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；14000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。14000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和170μL試劑二，混勻，30℃孵育5min，加入20μL試劑三，混勻後立即記錄340nm處初始吸光值A1和 1min後的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

NADP-ME活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NADP-ME（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T= 3215×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NADP-ME（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T = 3215×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NADP-ME（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T =6.43×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

b.用96孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NADP-ME（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T= 6431×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每g組織每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NADP-ME（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T = 6431×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾生成1 nmol NADPH定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

NADP-ME（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T =12.86×ΔA

V反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光係數，6.22×103 L / mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體(ti) 積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬(wan) 。

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

NADP-蘋果酸酶（Malic enzyme，NADP-ME）試劑盒