mediomics：Bridge-It PDE檢測試劑盒：Bridge-It® cAMP-磷酸二酯酶 (PDE) 檢測試劑盒，96 孔格式 

Bridge-It® cAMP 磷酸二酯酶 (PDE) 測定是一種基於熒光的高通量篩選 (HTS) 方法，用於測量純化來源的環核苷酸磷酸二酯酶活性並確定其抑製劑的 IC 50。該測定基於 Bridge-It® cAMP 多合一熒光測定（Mediomics，目錄號 122938）的形式。

應用：

• PDE相關藥物發現項目

• 心、肺（即COPD）、血小板功能和炎症機製的研究

• 焦慮症或神經退行性疾病的研究

特征：

• 簡單： 將測試樣品或標準品與測定溶液混合並在 ~25°C 下孵育

• 快速： 孵育 30 分鍾後讀取熒光信號

• 靈活： 檢測方法適用於低通量和高通量篩選形式

cAMP、PDE 和 Bridge-It 熒光測定的背景信息

3',5'-環單磷酸腺苷 (cAMP)

3',5'-環單磷酸腺苷 (cAMP) 是重要的第二信使，參與多種生物過程的調節。 cAMP 的測量在新藥發現中尤其重要，因為 cAMP 水平與新藥發現的主要靶標之一——G 蛋白偶聯受體 (GPCR) 的活性密切相關。用於測定 cAMP 濃度的 Mediomics 熒光 cAMP 測定方法基於上述測定平台設計。 CAP 是一種細菌 DNA 結合蛋白，其 DNA 結合活性取決於 cAMP 的存在，被用作測量 cAMP 水平的高度特異性生物傳感器。當 PDE 將 cAMP 水解為 AMP 時，cAMP 濃度降低，從而導致 CAP-DNA 複合物形成減少，並與探針形成更多遊離“半位點"雙鏈體（未猝滅）。熒光信號的增加與 PDE 活性成正比。

Bridge-It® PDE 檢測 – cAMP 標準曲線

以下 cAMP 標準曲線代表使用 Bridge-It® PDE 測定法製備的曲線。它顯示了在 384 孔板中的緩衝液 B 中製備的標準曲線，並在添加 2X 檢測溶液 30 分鍾、1 小時和 2 小時後讀取熒光信號。

Bridge-It® PDE 檢測 – PDE 活性檢測

以下 PDE 活性測定是使用 Bridge-It® PDE 測定製備的代表性測定。相對活性是在含有指示量的牛腦 PDE 的樣品中測量的（Sigma，St. Louis，MO，目錄號 P9529）。將反應在室溫下溫育30分鍾並通過添加0.5ul終止溶液來終止。添加 2X 測定溶液，並在室溫下孵育 40 分鍾後讀取信號。

Bridge-It® PDE 測定 – IC 50測定

以下測定是使用 Bridge-It® PDE 測定製備的代表性測定。使用來自牛腦的 0.8 mU PDE（Sigma，St. Louis，MO，Cat# P9529）和一定量的 IBMX（Sigma，St. Louis，MO）測量樣品的相對活性。

注意：RA（相對活性）的定義位於協議第 8 頁。 PDE 測定在標準 384 孔板中進行，最終 10 ul 反應液含有 1 x PDE 反應緩衝液（25 mM Tris，pH 7.4，100 mM NaCl，BSA 0.1 mg/ml，CaCl2 0.03 mM，鈣調蛋白（Sigma， St. Louis, MO, Cat# P1431) 10 U/ml)，含有來自牛腦的 0.8 mU PDE (Sigma, St. Louis, MO, Cat# P9529) 和一定量的 IBMX (Sigma, St. Louis, MO) ）。將酶和 IBMX 混合並在室溫下預溫育 5 分鍾。添加6 pmole cAMP，並將反應在室溫下溫育30分鍾，並通過添加0.5ul終止溶液來終止。添加 2X 測定溶液，並在室溫下孵育 40 分鍾後讀取信號。

研究用途： 僅供研究使用，不可用於診斷程序。

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