LeapWal PolyShooter 蛋白轉染試劑，產(chan) 品編碼：P19103。

LeapWal PolyShooter 蛋白轉染試劑，

PolyShooterTM Protein

Transfection Reagent

For the transfection of biologically active proteins and peptides.

 Catalog Number：P19103

01/產(chan) 品概述

蛋白質轉染是將生物學上有活性的蛋白質或肽段導入活細胞，通過替換體(ti) 內(nei) 具有缺陷或缺失的蛋白而發揮治療作用的新型手段。與(yu) 傳(chuan) 統小分子化合物藥物相比，蛋白質藥物具有更強的特異性和效用，在低濃度時就可以表現出高特異性和高活性。此外，在活細胞內(nei) 遞送蛋白質能夠獲得比基因轉染更迅速的蛋白表達，是核酸轉染的替代方式，可作為(wei) 一種功能強大的研究方法或治療策略，廣泛應用於(yu) 生命科學領域。

基於(yu) 肽轉導結構域（PTD）的技術已成功開發用於(yu) 蛋白質的胞內(nei) 轉染。然而，這些PTD與(yu) 蛋白質的相互作用較差，通常需要蛋白質和PTD之間形成共價(jia) 連接。目前已開發出多種試劑用於(yu) 蛋白質的胞內(nei) 轉染，如基於(yu) 多肽、陽離子脂質和聚合物的轉染試劑。這些轉染試劑主要是通過非共價(jia) 相互作用與(yu) 蛋白質形成複合物，然後通過胞吞作用進入細胞，這些蛋白質複合物通常會(hui) 進入內(nei) 涵體(ti) 中，如果不能及時從(cong) 內(nei) 涵體(ti) 中釋放，蛋白質就會(hui) 在內(nei) 涵體(ti) 發展成為(wei) 溶酶體(ti) 後，在溶酶體(ti) 中發生降解。因此，轉染試劑應該有很強的破膜活性，從(cong) 而保證轉染蛋白能夠從(cong) 內(nei) 涵體(ti) 中釋放進入細胞質並發揮作用。

PolyShooterTM Protein Transfection Reagent是一種基於(yu) 陽離子高分子聚合物的新型蛋白轉染試劑，適用於(yu) 幾百Da的小分子多肽到幾百kDa的大分子蛋白質的轉染。其原理為(wei) 帶正電的陽離子高分子轉染試劑與(yu) 蛋白質通過靜電相互作用、疏水相互作用以及氫鍵相互作用等多種非共價(jia) 相互作用的協同作用與(yu) 蛋白質結合形成帶正電的複合物，之後與(yu) 細胞表麵帶負電的蛋白多糖相互作用，並通過內(nei) 吞作用進入細胞。在內(nei) 涵體(ti) 熟化過程中，隨著pH值的降低，陽離子高分子轉染試劑與(yu) 內(nei) 涵體(ti) 膜的相互作用增加，導致內(nei) 涵體(ti) 膜的破裂，從(cong) 而將蛋白質釋放入細胞質中發揮作用。由於(yu) 轉染試劑通過非共價(jia) 形式與(yu) 蛋白質結合形成複合物，因此不會(hui) 幹擾蛋白質的生物學活性。

PolyShooterTM Protein Transfection Reagent對多種常見細胞具有高水平轉染效率，具有高效低毒、操作簡單、重複性好等優(you) 點。另外，由於(yu) 該陽離子高分子轉染試劑與(yu) 蛋白質是通過多種非共價(jia) 相互作用協同結合蛋白質的，因此可以適用於(yu) 各種理化性質的蛋白質轉染。PolyShooterTM Protein Transfection Reagent可用於(yu) 細胞信號傳(chuan) 導和凋亡檢測、蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白質定位和隔室穿梭等各種功能研究。

02/產(chan) 品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，有效期6個(ge) 月。-30℃至-10℃保存，有效期12個(ge) 月，避免反複凍融。

04/產(chan) 品特點

理想的蛋白轉染效率——針對廣泛類型的細胞，均表現出理想的蛋白質轉染效率

蛋白活性高——與(yu) 蛋白質非共價(jia) 結合，遞送後的蛋白和肽仍具有高生物學活性

細胞毒性低——作用溫和，生物相容性好

操作簡單——簡單快速的實驗方案，無需分離、克隆和轉染基因序列；孵育後3-12小時內(nei) 可獲得穩定的蛋白轉染效果

適用範圍廣——適用於(yu) 各種理化性質的蛋白質轉染

05/適用範圍

PolyShooterTM Protein Transfection Reagent是一種基於(yu) 陽離子高分子聚合物的新型蛋白轉染試劑，對多種常見細胞具有高水平轉染效率，適用於(yu) 幾百Da的小分子多肽到幾百kDa的大分子蛋白質及各種理化性質的蛋白質轉染。

06/實驗流程概要

07/實驗步驟（以24孔板為(wei) 例，其他培養(yang) 板加樣體(ti) 積參考表一：轉染量度標準）

1: 準備待轉染細胞

貼壁細胞：轉染前一天，將胰酶消化後的細胞按照每孔1-3x105個(ge) 細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為(wei) 50%-100%。

懸浮細胞：轉染當天，配製轉染試劑-蛋白質複合物之前，在24孔板中進行細胞鋪板，每500 µL生長培養(yang) 基中加入2-6x105個(ge) 細胞。

Ø 細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，待轉染細胞應處於(yu) 良好生長狀態，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90% 的細胞進行轉染。

2: 準備PolyShooterTM Protein轉染試劑-蛋白質複合物

（1）取1-10 μg 蛋白質加入到1.5 mL離心管中，加入1-3 μL PolyShooterTM Protein轉染試劑與(yu) 蛋白質混合，室溫孵育3分鍾。

Ø 蛋白質的實際使用量需根據蛋白質的類型和具體(ti) 實驗進行優(you) 化，不同性質的蛋白質使用量相差較大，例如：熒光蛋白EGFP建議24孔板使用量為(wei) 5-10 μg，熒光蛋白Phycoerythrin建議24孔板使用量為(wei) 0.5-2 μg，凋亡蛋白Saporin建議24孔板使用量為(wei) 0.1-1 μg。

Ø 轉染試劑的用量應根據目的細胞類型、接種細胞密度、培養(yang) 皿的大小進行調整，請參見表一。

（2）往上述混合物中加入100 μL無血清基礎培養(yang) 基1（與(yu) 培養(yang) 體(ti) 係一致，且無血清無雙抗），輕輕混勻，在室溫下靜置20分鍾，形成轉染試劑-蛋白質複合物。

（3）20分鍾後，往轉染試劑-蛋白質複合物中加入400 μL無血清基礎培養(yang) 基2（與(yu) 培養(yang) 體(ti) 係一致，且無血清無雙抗）稀釋複合物。

3: 蛋白質轉染

棄去細胞培養(yang) 基，用預熱的PBS清洗細胞1-2次，將上述500 µL轉染試劑-蛋白複合物加入每孔細胞進行蛋白質轉染。

4. 分析蛋白質轉染效果

轉染試劑-蛋白複合物與(yu) 細胞孵育3-12小時後，可根據實際情況，用熒光檢測法、流式細胞術、Western Blot、免疫熒光染色等實驗方法進行後續檢測及分析。

表一：轉染量度標準

08/注意事項

1. 蛋白質質量：蛋白質中存在的雜質、汙染物和添加劑都可能會(hui) 影響蛋白質遞送效率，我們(men) 建議使用盡可能高純度的蛋白質樣品。

2. 細胞質量：細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90%的細胞進行轉染。

3. 細胞密度：建議細胞傳(chuan) 代後12-24 h內(nei) 、細胞密度為(wei) 50%-100% 時進行轉染。不同的蛋白轉染實驗，對細胞密度的要求不盡相同。在進行不同蛋白質或不同細胞係的轉染時，需要根據說明書(shu) 再次優(you) 化實驗條件。此外，在實驗過程中需保證相同的接種條件，確保實驗數據的可重複性。

4.蛋白質與(yu) 轉染試劑使用量：蛋白質的實際使用量需根據蛋白質的類型和具體(ti) 實驗進行優(you) 化，不同性質的蛋白質使用量相差較大。轉染試劑的用量應根據目的細胞類型、接種細胞密度、培養(yang) 皿的大小進行調整（參見表一）。想要獲得理想的蛋白遞送效果，需對蛋白質及轉染試劑的使用量進行優(you) 化，選擇適合的劑量。

5. 采用無血清轉染體(ti) 係進行蛋白質轉染可獲得高效的蛋白質遞送效果，這是因為(wei) 血清中的血清蛋白會(hui) 通過競爭(zheng) 結合蛋白轉染試劑，從(cong) 而影響轉染試劑-蛋白質複合物的形成和穩定性。

6. 由於(yu) 一些特殊培養(yang) 基中的某些成分可能會(hui) 抑製陽離子聚合物介導的轉染，因此有必要檢測特殊培養(yang) 基與(yu) PolyShooterTM Protein Transfection Reagent的相容性。

7. 為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗。

8. 本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

09/實驗案例分析

1: 轉染前一天，將CHO、NIH-3T3、H1299和HEK293細胞分別接種於(yu) 24孔板，使其在轉染時密度約為(wei) 95%。

2: 按照每孔計量，取10 μg EGFP（1mg/mL）蛋白加入到1.5 mL離心管中，再分別加入1 μL、2 μL、3 μL PolyShooterTM Protein Transfection Reagent與(yu) 蛋白質混合，室溫孵育3 min。

3: 往混合物中加入100 μL無血清基礎DMEM培養(yang) 基，輕輕混勻，在室溫下靜置20 min，形成轉染試劑-蛋白質複合物。

4: 20分鍾後，往複合物中加入400 μL無血清基礎DMEM培養(yang) 基稀釋複合物。

5: 棄去細胞培養(yang) 基，用預熱的PBS清洗細胞2次，將上述500 µL轉染試劑-蛋白質複合物加入每孔細胞，與(yu) 細胞孵育4小時。

6: 轉染4小時後，用熒光顯微鏡檢測EGFP綠色熒光蛋白轉染效果，實驗結果如圖2所示。

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