LeapWal PolyShooter 轉染試劑，產(chan) 品編碼：P09110。

LeapWal PolyShooter 轉染試劑，

PolyShooterTM

Transfection Reagent

Polymer Reagent For Transfecting Common Cell Lines

Catalog Number：P09110

01/產(chan) 品概述

細胞轉染是指將外源分子導入真核細胞內(nei) 以改變其基因型或表型的一種技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為(wei) 研究和控製基因功能的常規手段，廣泛應用於(yu) 基因功能研究、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產(chan) 等領域。轉染大致可分為(wei) 物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。其中化學介導方法因其兼具高效低毒、方便快捷等優(you) 點，應用廣泛。化學介導方法包括經典的磷酸鈣共沉澱法、脂質體(ti) 轉染方法以及多種陽離子物質介導的轉染方法。

理想的細胞轉染方法應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(you) 點。已有眾(zhong) 多文獻報道，脂質體(ti) 本身會(hui) 參與(yu) 細胞生理活動，影響基因表達，對研究數據產(chan) 生一定程度的幹擾。同時，脂質體(ti) 會(hui) 對目的細胞造成細胞毒性，這種毒性是由其脂質特性決(jue) 定的。市麵上多種商業(ye) 化的脂質體(ti) 轉染試劑要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為(wei) 佳，這有助於(yu) 減少陽離子脂質體(ti) 細胞毒性造成的影響。但是，如果研究的基因要求比較長的表達時間，例如細胞周期相關(guan) 基因，或者細胞表麵蛋白，又或者轉染後續需要進行繼續培養(yang) 和功能研究，則不適合用脂質體(ti) 核酸轉染試劑。目前眾(zhong) 多的研究者和生物公司將新一代轉染試劑的開發聚焦在非脂質體(ti) 的聚合物上，以尋找更高效低毒，同時對研究影響較小的轉染試劑。

LeapWal PolyShooter 轉染試劑，即PolyShooter Transfection Reagent是一種基於(yu) 陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用於(yu) DNA、RNA的轉染。其原理為(wei) 帶正電的高分子聚合物與(yu) 核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的複合物後，與(yu) 細胞表麵帶負電的蛋白多糖相互作用，並通過內(nei) 吞作用進入細胞，隨後在胞質中釋放，實現外源核酸的細胞轉染。

LeapWal PolyShooter 轉染試劑對多種常見細胞具有高水平轉染效率，具有高效低毒、操作簡單、重複性好等優(you) 點。其*的配方使其可直接加入培養(yang) 基中，血清的存在不會(hui) 影響轉染效率，這樣可以減少去除血清對細胞的損傷(shang) 。同時，轉染後不需要除去PolyShooter Transfection Reagent-核酸複合物或更換新鮮培養(yang) 基，也可根據具體(ti) 情況優(you) 化轉染體(ti) 係。

02/產(chan) 品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，有效期6個(ge) 月。-30℃至-10℃保存，有效期12個(ge) 月，避免反複凍融。

04/產(chan) 品特點

優(you) 秀的轉染效率——針對廣泛類型的細胞，均表現出優(you) 秀的轉染效率和高重組蛋白表達水平

細胞毒性低——作用溫和，能較好地實現高轉染效率與(yu) 低細胞毒性之間的平衡

操作簡單——在血清存在時亦具有可靠的轉染效率，轉染後無需去除複合物或更換新鮮培養(yang) 基

高性價(jia) 比——經濟的價(jia) 格，同時實現高效的轉染效果

05/適用範圍

PolyShooter Transfection Reagent采用陽離子高分子聚合物為(wei) 主要成分，適用於(yu) DNA、RNA的轉染。

06/實驗流程概要

07/實驗步驟（以24孔板為(wei) 例，其他培養(yang) 板加樣體(ti) 積參考表一：轉染量度標準）

1: 準備待轉染細胞

貼壁細胞：轉染前一天，將消化後的細胞按照每孔0.3-2x105個(ge) 細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為(wei) 50%-60%。

懸浮細胞：轉染當天，配製轉染試劑-核酸複合物之前，在24孔板中進行細胞鋪板，每500 µL生長培養(yang) 基中加入2-5x105個(ge) 細胞。

Ø 細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，待轉染細胞應處於(yu) 良好生長狀態，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90% 的細胞進行轉染。

2: 準備PolyShooter轉染試劑-核酸複合物

（1）取1 μg質粒加入到1.5 mL離心管中，加入2.5 μL* PolyShooter 轉染試劑與(yu) 質粒混合，室溫孵育3分鍾。

Ø * 轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，通常情況下，DNA（μg）和 PolyShooter轉染試劑（μL）的用量比例為(wei) 1：2.5。建議初次使用時，可在1：2-1：5的範圍內(nei) 調整以優(you) 化轉染效果。

（2）往上述混合物中加入100 μL無血清基礎培養(yang) 基（與(yu) 培養(yang) 體(ti) 係一致，且無血清無雙抗），輕輕混勻，在室溫下靜置30分鍾，形成PolyShooter轉染試劑-核酸複合物。

Ø PolyShooterTM轉染試劑-核酸複合物在室溫下4個(ge) 小時內(nei) 保持穩定。

3: 細胞轉染

給細胞更換新鮮的預熱的*培養(yang) 基500 μL/孔，將上述100 µL PolyShooter 轉染試劑-核酸複合物加入每孔細胞，輕輕搖動培養(yang) 板混勻。

Ø 對於(yu) 懸浮細胞係：轉染5小時後，可選擇加入PMA和/或PHA以提高CVM啟動子的活性並促進基因表達。對於(yu) Jurkat細胞，PHA和PMA的終濃度分別為(wei) 1 µg/mL和50 ng/mL，可以提高CMV啟動子活性和基因表達。對於(yu) K562細胞，隻加入PMA足以提高啟動子活性。

4. 分析轉染細胞

轉染細胞培養(yang) 24-48小時後，可根據實際情況用熒光檢測法、Western Blot、RT-PCR、ELISA、流式細胞術、報告基因等檢測轉染效果，或加入篩選藥物進行穩定細胞株的篩選。

08/注意事項

1. 核酸質量：想要獲得最高的轉染效率和更低的細胞毒性，應選用高純度、無菌、無汙染、無內(nei) 毒素的優(you) 質核酸。質粒中的內(nei) 毒素是轉染的大敵，內(nei) 毒素會(hui) 導致轉染效率顯著下降，特別是對內(nei) 毒素敏感的細胞，例如原代細胞、懸浮細胞、造血細胞等。推薦使用無內(nei) 毒素質粒抽提試劑盒進行質粒提取，保證質粒A260/A280比值為(wei) 1.8-2.0。同時，需合理計算質粒用量，轉染過量的質粒可能會(hui) 導致細胞毒性甚至死亡；

2. 細胞質量：細胞狀態會(hui) 極大影響轉染效率，建議使用生長處於(yu) 指數期、存活率大於(yu) 90%的細胞進行轉染；

3. 細胞密度：建議細胞傳(chuan) 代後12-24 h內(nei) 、細胞密度為(wei) 50%-60% 時進行轉染。不同的細胞轉染實驗，對細胞密度的要求不盡相同。在進行不同核酸或不同細胞係的轉染時，需要根據說明書(shu) 再次優(you) 化實驗條件。此外，在實驗過程中保證相同的接種條件，確保實驗數據的可重複性；

4. 質粒與(yu) 轉染試劑使用比例：對於(yu) 大多數細胞係，轉染複合物中DNA (μg)與(yu) PolyShooter Transfection Reagent (μL) 的比例在1：2至1：5之間，推薦比例為(wei) 1:2.5。想要獲得*的轉染結果，需要對這一比例進行優(you) 化，根據所轉染細胞及質粒選擇適合的轉染比例；

5. PolyShooter Transfection Reagent可用於(yu) 有血清培養(yang) 基的轉染，並且轉染前後不需要換培養(yang) 基。但是，製備轉染複合物時要求用無血清基礎培養(yang) 基稀釋DNA和轉染試劑，因為(wei) 血清會(hui) 影響複合物的形成；

6. 由於(yu) 一些特殊培養(yang) 基中的某些成分可能會(hui) 抑製陽離子聚合物介導的轉染，因此有必要檢測特殊培養(yang) 基與(yu) PolyShooter Transfection Reagent的相容性；

7. 為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗；

8. 本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

09/實驗案例分析

1: 轉染前一天，將圖2所示9種狀態良好的細胞接種於(yu) 24孔板，使其在轉染時密度約為(wei) 50%。

2: 按照每孔計量，取1μg GFP質粒加入到1.5 mL離心管中，加入2.5 μL PolyShooter Transfection Reagent與(yu) 質粒混合，室溫孵育3 min後，往混合物中加入100 μL無血清基礎DMEM培養(yang) 基，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成PolyShooter轉染試劑-核酸複合物。

3: 給細胞更換新鮮的預熱的*培養(yang) 基500 μL/孔，將上述100 µL PolyShooter 轉染試劑-核酸複合物加入每孔細胞，輕輕搖動培養(yang) 板混勻。

4：轉染細胞培養(yang) 48小時後，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達情況，並拍照記錄，實驗結果如圖2所示。

圖2: 轉染細胞培養(yang) 48小時後，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達情況

10/其他相關(guan) 產(chan) 品

paybet雷竞技

1. 國內(nei) 試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾(zhong) 多有名生命科學領域的研究試劑、儀(yi) 器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED Biosesystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosesolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chan) 品都提供售後服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為(wei) 客戶全麵解決(jue) 實驗、生產(chan) 、開發需求。公司整合國際與(yu) 國內(nei) 資源，加強網絡建設，提高公司內(nei) 部運作效率，為(wei) 客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為(wei) 客戶提供優(you) 惠的價(jia) 格。

雙雙寬迷你垂直係統 CE，2 位。 雙倍容量標準尺寸的雙單元，運行相當於(yu) 4 標準迷你凝膠。 包括 2 個(ge) 您選擇的梳子，2 個(ge) 玻璃板套，2 個(ge) 墊片套，2 個(ge) 用於(yu) 鑄造的凝膠包裹墊圈。玻璃板尺寸為(wei) 20 厘米 x 10 厘米（h）。 對於(yu) 迷你 SDS PAGE，迷你二維電泳。