LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑（5x），產(chan) 品編碼：LC110R。

LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑（5x）

ViralStarsTM LC

Lentivirus Concentration Solution

(5x)

Catalog Number：LC110R

01/產(chan) 品概述

基於(yu) 人類免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的慢病毒載體(ti) 是一種用於(yu) 基因轉移研究的載體(ti) 。慢病毒載體(ti) 可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體(ti) 上，從(cong) 而達到持久性表達目的序列的效果。在感染能力方麵，慢病毒載體(ti) 可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nei) 皮細胞、幹細胞等多種類型的細胞。對於(yu) 一些較難轉染的細胞，如原代細胞、幹細胞、不分化的細胞等，使用慢病毒載體(ti) 能大大提高目的基因或目的shRNA的轉導效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實現目的基因或目的shRNA的長期、穩定表達。在體(ti) 外實驗及體(ti) 內(nei) 實驗的研究中，慢病毒己經成為(wei) 表達外源基因或外源shRNA的常用載體(ti) 形式之一，並且正在獲得越來越廣泛的應用。

ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒濃縮試劑是針對慢病毒富集而優(you) 化的聚合物材料，它提供了一種簡單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。隻需將慢病毒上清液與(yu) 慢病毒濃縮試劑按比例混合，短時間孵育，采用標準離心機進行離心即可得到慢病毒顆粒沉澱。超濾、超速離心法等病毒濃縮法，操作時間長，步驟繁瑣，且通常會(hui) 有細胞碎片和血清蛋白等的汙染，病毒純度低。使用本產(chan) 品進行病毒濃縮後，病毒滴度可提高10-100倍，病毒回收率最高可達約90%，病毒損失少，並且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個(ge) 實驗過程可在 4 小時內(nei) 快速完成，無需超速離心即可獲得出色的回收效率。

02/產(chan) 品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃ 保存，有效期12 個(ge) 月。

04/產(chan) 品特點

* 簡單快速——操作簡單，無需超速離心，確保活性，實驗耗時不超過4小時

* 濃縮效果優(you) ——病毒滴度可濃縮10-100倍以上（Transduction Units/mL）

* 回收效率高——慢病毒回收效率高達 90% 以上

* 應用範圍廣——適用於(yu) 所有類型的慢病毒顆粒

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

1. 將含有慢病毒顆粒的培養(yang) 基轉移至無菌容器中，300xg離心10分鍾以除去細胞碎片。

Ø 為(wei) 保證病毒活性，濃縮前的病毒上清液應盡量選擇新鮮收集的病毒原液。

2. 使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

Ø 如果使用濾膜過濾，推薦使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚碸（PES）膜，不推薦使用硝酸纖維素膜（NC）。

3. 向每4體(ti) 積含慢病毒的上清液中加入1體(ti) 積慢病毒濃縮試劑（5x），使慢病毒濃縮試劑（5x）稀釋為(wei) 工作濃度（1x）。

4. 將上述混合物於(yu) 4℃ 搖床中慢速孵育3小時或過夜。

Ø 慢病毒顆粒在 4℃ 可穩定長達4天。

5. 將混合物4℃ 4000 x g 離心25分鍾。離心後，慢病毒顆粒可能在容器底部顯示為(wei) 米色或白色沉澱。

6. 小心棄去上清液，4℃ 4000 x g 離心5分鍾，再次棄盡殘餘(yu) 液體(ti) ，應盡量避免吸走沉澱物，該沉澱物即為(wei) 慢病毒顆粒。

7. 用初始體(ti) 積（原上清液體(ti) 積）1/10 -1/100 預冷的慢病毒保存液重懸病毒顆粒，使用移液器小心吹打，重懸慢病毒顆粒。

Ø 重懸病毒沉澱時，吹打操作要輕柔，可選擇慢病毒保存液（LS110R）、*培養(yang) 基或FBS重懸慢病毒。

8. 小體(ti) 積分裝慢病毒，儲(chu) 存於(yu) -80℃ 冰箱或液氮中，留取少量病毒測定滴度。

Ø 應盡量避免慢病毒反複凍融，否則會(hui) 降低病毒滴度。

07/適用範圍

適用於(yu) 任何慢病毒顆粒的濃縮方法。

08/注意事項

1. 為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗；

2. 所有慢病毒操作均需在BSL2級生物安全櫃中進行；

3. 本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

09/實驗案例分析

1. 使用10cm細胞培養(yang) 皿培養(yang) ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line（CL110001），待細胞密度為(wei) 60-70%左右開始包裝慢病毒；

2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit（LP110-10）進行慢病毒包裝（陽性對照質粒含GFP綠色熒光蛋白基因），具體(ti) 包裝步驟按照說明書(shu) 進行；

3. 準備目的細胞：將需感染的目的細胞293T以(1-3)x104的密度接種於(yu) 96孔板內(nei) ，次日即可進行慢病毒感染；

4. 待病毒包裝48h後，收集慢病毒上清液約9mL，300xg離心10分鍾以除去細胞碎片，使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

5. 取1mL病毒上清液作為(wei) 濃縮前對照1*，剩餘(yu) 8mL病毒上清液中加入2mL本產(chan) 品進行慢病毒濃縮，具體(ti) 慢病毒濃縮步驟按照說明書(shu) 進行，保留1mL濃縮後應棄去的上清液作為(wei) 對照2#，使用800μL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution（LS110R）輕輕重懸慢病毒顆粒，即可得到濃縮10倍的慢病毒；

6. 慢病毒感染目的細胞：將96孔板細胞棄去上清，每孔加入新鮮培養(yang) 基100μL，Polybrene（LE110-01）0.2μL，濃縮後慢病毒100μL或對照1*（濃縮前慢病毒原液）100μL或對照2#（濃縮後應棄去的慢病毒上清液）100μL；

7. 繼續培養(yang) 細胞48h後，使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光強度，實驗結果如圖2所示。

圖2: 慢病毒感染目的細胞293T觀察GFP表達情況。（左）濃縮10x慢病毒，（中）對照1*（濃縮前慢病毒原液），（右）對照2#（濃縮後應棄去的慢病毒上清液）。

10/其他相關(guan) 產(chan) 品

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