Polybrene 聚凝胺 10mg/mL，產(chan) 品編碼：LE110。

Polybrene 聚凝胺 10mg/mL，

Polybrene (10 mg/mL)

01/產(chan) 品概述

Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一種多聚陽離子聚合物，廣泛用於(yu) 逆轉錄病毒及慢病毒介導的基因轉染，是一種常用的促感染試劑，能夠顯著提高病毒與(yu) 細胞的接觸及感染效率，其作用機理可能是通過中和細胞表麵唾液酸與(yu) 病毒顆粒之間的靜電排斥從(cong) 而促進吸附作用。同時，Polybrene也常用於(yu) 哺乳動物細胞的DNA轉染實驗以增強脂質體(ti) 的轉染效率。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來生產(chan) 非特異性凝集的紅細胞。它還參與(yu) 到低分子量DNA的轉化中。此外，Polybrene也多用於(yu) 蛋白測序，因為(wei) 小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親(qin) 和性。

本產(chan) 品以溶液形式提供，粉末用 0.9% NaCl 配製成10 mg/mL的溶液，並用0.22 μm濾膜過濾除菌。使用時一般按1:1000-1:5000稀釋，依細胞種類不同稀釋比例不同，具體(ti) 使用濃度請查閱相關(guan) 文獻。

02/產(chan) 品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。-20℃ 保存，有效期24個(ge) 月。建議分裝保存，避免反複凍融。

04/產(chan) 品特點

v 即用型試劑，無需進行試劑配置，簡單方便。

v 無菌製劑，可直接加入細胞使用。

05/實驗步驟

慢病毒感染（Lentiviral Infection）實驗步驟如下：

1. 包裝慢病毒並測定慢病毒滴度，通過病毒滴度和MOI計算目的細胞感染所需的病毒量。

2. 實驗前一天，將生長狀態良好的目的細胞消化計數後稀釋至1-3×105/mL，加入12孔板，1 mL/孔。放入37℃，5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 。

Ø 懸浮細胞不需要提前一天接種，實驗前將細胞計數接種後，直接加入病毒混合液即可。

3. 配製慢病毒+polybrene+培養(yang) 基混合液。polybrene一般使用濃度為(wei) 2-10 μg/mL，但對某些細胞（如末端分化的神經元，DC細胞等）毒性較大，初次使用建議先做毒性測試。

4. 吸去12孔板中目的細胞的培養(yang) 基，加入3中配製的慢病毒混合液，放入37℃，5% CO2 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

Ø 感染懸浮細胞或半懸浮細胞，則需采用平角離心轉染法，即將適量的病毒液加入細胞培養(yang) 板後，封好口，放入平角離心機中，低速（200xg）離心
1 h
，然後放入培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

Ø 若實驗條件有限，沒有平角離心機，可用離心管代替，將細胞吸入離心管中，進行低速離心，去掉大部分上清，加入適量的病毒液，室溫放置
15 min，然後將細胞和病毒液同時吸出轉入培養(yang) 板中繼續培養(yang) 。

5. 病毒感染16 h後更換為(wei) 新鮮培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

6. 病毒感染36-48 h後，可加入篩選培養(yang) 基進行穩定細胞株篩選，或采用熒光顯微鏡、流式細胞術、western blot、qPCR等方法檢測目的基因表達情況。

06/適用範圍

Polybrene目前廣泛用於(yu) 逆轉錄病毒及慢病毒介導的基因轉染，是一種常用的促感染試劑，能夠顯著提高病毒與(yu) 細胞的接觸及感染效率。

07/注意事項

1. Polybrene對某些細胞（如末端分化的神經元、DC 細胞）毒性較大，初次應用建議先做毒性測試。

2. 本說明書(shu) 中提供的Polybrene使用濃度範圍僅(jin) 供參考，具體(ti) 使用濃度請參考相關(guan) 文獻。

3. 為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗。

4. 所有慢病毒操作均需在BSL2級生物安全櫃中進行。

5. 本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

08/實驗案例分析

1. 提前一天使用10 cm細胞培養(yang) 皿培養(yang) ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line（CL110001），待細胞密度為(wei) 75% 左右開始包裝慢病毒。

2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit（LP110-10）進行慢病毒包裝。取10 μL慢病毒包裝輔助質粒混合物（Package Plasmid Mix）加入到2 mL離心管中，加入2.5 μL表達GFP 的對照質粒（Control Plasmid），輕輕混合，加入32 μL PolyShooter轉染試劑與(yu) 質粒混合，室溫孵育3分鍾。

3. 往上述混合物中加入1.8 mL無血清無雙抗的DMEM基礎培養(yang) 基，輕輕混勻，在室溫下靜置30分鍾，形成轉染試劑-核酸複合物。

4. 將上述1.8 mL轉染試劑-核酸複合物輕輕地逐滴均勻加入10 cm皿慢病毒包裝細胞中，輕輕搖動培養(yang) 皿混勻，置於(yu) 37℃，5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 產(chan) 毒。

5. 轉染24 h後，棄去初始病毒上清液，加入10 mL新鮮的*培養(yang) 基(DMEM +10% FBS)至10 cm細胞培養(yang) 皿中，置於(yu) 37℃，5% CO2培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。

6. 轉染48 h後，收集病毒上清液，再加入10 mL新鮮的*培養(yang) 基(DMEM +10% FBS)至10 cm細胞培養(yang) 皿中，置於(yu) 37℃，5% CO2培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。

7. 轉染72 h後，進行二次病毒上清液收集，與(yu) 48 h收集的上清液混合後，300xg離心10分鍾以除去細胞碎片，0.22 μm濾器過濾，使用ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒濃縮試劑盒（LC110R）進行20倍濃縮，使用1 mL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution（LS110R）重懸慢病毒顆粒。

8. 使用上述製備的慢病毒感染目的細胞HEK293T，設置兩(liang) 組實驗組: (1) 病毒+polybrene (10 μg/mL)+培養(yang) 基混合液，(2) 病毒+培養(yang) 基混合液(不添加polybrene)。

9. 使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達情況，並拍照記錄。使用流式細胞術統計GFP陽性細胞數，實驗結果如圖2所示。

圖2: 慢病毒(GFP)感染目的細胞HEK293T的過程中是否添加polybrene (10 μg/mL)的感染效率對比實驗。

09/其他相關(guan) 產(chan) 品

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