LUCS 13 是一種可滲透細胞的核酸染料，在與核酸結合後呈現綠色熒光。該染料具有高熒光產量，且結構與 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用於(yu) 對活的和死的真核細胞以及革蘭(lan) 氏陽性和革蘭(lan) 氏陰性細菌中的 DNA 和 RNA 進行染色。染料被 488 nm 的藍色激光激發。其熒光發射在熒光素通道中檢測到，與(yu) DNA 結合時峰值為(wei) 509 nm，與(yu) RNA 結合時峰值為(wei) 514 nm。

該染料可用於(yu) 同時標記細胞不可滲透的核標記物（例如 YoDi-3），以使用熒光顯微鏡和流式細胞術評估細胞活力。

協議

確切的方案取決(jue) 於(yu) 具體(ti) 的細胞類型和實驗任務。一般來說，可以描述如下：

1. 準備 50 µM LUCS 13 儲(chu) 備溶液。為(wei) 此，將 990 µl 去離子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。儲(chu) 備液可以等分並冷凍以供長期儲(chu) 存。

2. 要製備 1 µM LUCS 13 工作溶液，請將 20 µl 50 µM LUCS13 庫存添加到 980 µl PBS 中。

3. 以合適的方式小心地從(cong) 生長表麵去除貼壁細胞。對於(yu) 懸浮細胞，從(cong) 下一點開始工作。

4. 用冷 PBS（pH 7.4）清洗細胞一次。 300 g離心 5 分鍾獲得種子細胞 。

5. 將細胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中於(yu) 37°C 孵育 30 分鍾。

6. 300 g離心 5 分鍾去除染料溶液 。

7. 用 PBS 清洗細胞一次。

8. （可選）如有必要，可以將細胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分鍾，用 PBS 洗滌，然後用另一種染色劑重新染色。

重要的

• 處理 LUCS 13 溶液時請使用塑料瓶，因為(wei) 稀釋的染料可能會(hui) 粘在玻璃上。

• 使用無磷酸鹽緩衝(chong) 液（例如鹽水中的 15 mM HEPES）可獲得更明亮的染色結果。

• 在開始實驗之前，測試幾種染料濃度範圍從(cong) 10 nM 到 5 µM，以確定最佳的染料稀釋度。染色結果受許多因素影響：生長培養(yang) 基、細胞密度、其他細胞類型的存在、染色持續時間等。