使用 LumiZol 試劑快速分離 RNA、DNA 和蛋白質

LumiZol Reagent 設計用於(yu) 從(cong) 各種來源（植物、動物、細菌和酵母）的細胞和組織樣品中快速分離 RNA、DNA 和蛋白質。 LumiZol Reagent 是一種含有苯酚、異硫氰酸胍以及分離高質量核酸和蛋白質所需的其他成分的溶液。苯酚和異硫氰酸胍可裂解細胞並有效抑製核糖核酸酶，從(cong) 而保持 RNA 完整。均質化並添加氯仿後，樣品分離成上層水相、中間相和下層有機相。 RNA 可以用異丙醇從(cong) 上相沉澱，而 DNA 和蛋白質可以分別用乙醇和異丙醇從(cong) 中間相和下層有機相沉澱。

用於 RNA、DNA 和蛋白質分離的樣品：

• 植物和動物組織——30-100毫克；

• 貼壁真核細胞 — 1×10 5至 1×10<sup7< sup="" style="box-sizing: border-box;">;

• 懸浮真核細胞、酵母 — 5×10 6至 10×10 6；

• 細菌細胞 — 1×10 7。

RNA分離

使用新鮮或液氮速凍樣品以獲得最佳 RNA 分離效果。在 LumiZol 試劑中均質化之前，請勿解凍樣品。

1. 根據您的起始材料在 LumiZol 試劑中裂解樣品：

• 組織：在 1 mL LumiZol 試劑中勻漿組織樣本，並將勻漿轉移至新的 1.5 mL 管中。

• 細胞：棄去培養(yang) 基，用 0.5–1 mL LumiZol 試劑重懸細胞沉澱或單層細胞，然後將裂解物轉移至新的 1.5 mL 試管中。

2. （可選）如果樣品脂肪含量高，則將裂解液在 4 °C 下以 12,000 × g 離心 5 分鍾，然後將上清液轉移至新的 1.5 mL 管中。

3. 將管在室溫下孵育 5 分鍾。

4. 向裂解液中添加 0.2 mL 氯仿（每 1 mL 用於(yu) 裂解的 LumiZol 試劑），通過翻轉管充分混合，並在室溫下孵育 2 分鍾。

5. 將管在 4°C 下以 12,000 × g 離心 15 分鍾。離心後，混合物分成兩(liang) 相：無色水相和黃色有機相，其間有中間相。

6. 將上層水相轉移至新的 1.5 mL 管中，不要接觸間相。如果樣品中RNA的量非常少，則在水相中添加共沉澱劑。保留有機相和界麵用於(yu) DNA 和蛋白質提取。

7. 向水相中加入0.8體(ti) 積的異丙醇，充分混合，並在室溫下孵育10分鍾。

8. 將管在 4°C 下以 12,000 × g 離心 10 分鍾。

9. 棄去上清液，向 RNA 沉澱中加入 1 mL 70% 乙醇，充分混勻，並在 4 °C 下以 7,500 × g離心管 5 分鍾。

10. 棄去上清液，將 RNA 沉澱風幹 5-10 分鍾。

11. 將 RNA 沉澱溶解在 50–100 μL 無 RNase 水中。

DNA分離

1. 除去“RNA 分離"部分步驟 5 中獲得的界麵上的任何剩餘(yu) 水相。

2. 向界麵相和有機相中添加 0.3 mL 100% 乙醇（每 1 mL 《RNA 分離》步驟 1 中使用的 LumiZol 試劑），通過翻轉管混合，並在室溫下孵育 2-3 分鍾。

3. 將管在 4 °C 下以 2,000 × g 離心 5 分鍾。將上清液轉移至新的 1.5 mL 管中。上清液可用於(yu) 後續的蛋白質提取。

4. 將 DNA 沉澱重懸於(yu) 1 mL 檸檬酸鈉/乙醇溶液（10% 乙醇中的 0.1 M 檸檬酸鈉，pH 8.5）中。

5. 孵育 30 分鍾，偶爾混合。

6. 將管在 4 °C 下以 2,000 × g 離心 5 分鍾。丟(diu) 棄上清液。

7. 再重複一次步驟 4-6。

8. 將 1 mL 70% 乙醇添加到 DNA 沉澱中，充分混勻，然後在 4 °C 下以 2,000 × g離心管 5 分鍾。

9. 棄去上清液，將 DNA 沉澱風幹 5-10 分鍾。

10. 將 DNA 沉澱重懸於(yu) 0.3–0.6 mL 的 8 mM 氫氧化鈉中。

11. 將管在 4 °C 下以 12,000 × g 離心 10 分鍾，將上清液轉移至新的 1.5 mL 管中，並用 Tris-HCl 緩衝(chong) 液將 pH 調節至 7–8 [添加 5 μL 1 M Tris-HCl 緩衝(chong) 液（pH 4.5）至300μL DNA溶液]。

蛋白質分離

1. 向《DNA 分離》部分第 3 步獲得的上清液中添加 1.5 mL 異丙醇（每 1 mL 《RNA 分離》步驟 1 中使用的 LumiZol 試劑），通過翻轉管充分混合，並孵育 10分鍾在室溫下。

2. 將管在 4°C 下以 12,000 × g 離心 10 分鍾。丟(diu) 棄上清液。

3. 將蛋白質沉澱重新懸浮在 2 mL 鹽酸胍/乙醇溶液（0.3 M 鹽酸胍於(yu) 95% 乙醇中）中。

4. 將管在室溫下孵育 20 分鍾。

5. 將管在 4 °C 下以 7,500 × g 離心 5 分鍾。丟(diu) 棄上清液。

6. 再重複步驟 3-5 兩(liang) 次。

7. 向蛋白沉澱中加入 2 mL 100% 乙醇，充分混勻，室溫孵育 20 分鍾。

8. 將管在 4 °C 下以 7,500 × g 離心 5 分鍾。丟(diu) 棄上清液。

9. 將蛋白質沉澱風幹 5-10 分鍾。

10. 將蛋白質沉澱溶解在含有 SDS 的緩衝(chong) 液中（例如，用於(yu) 將蛋白質樣品加載到聚丙烯酰胺凝膠上的樣品緩衝(chong) 液）。