陽離子脂質(lipoplexes)和聚合物(polyplexes)是常用的非病毒基因遞送係統。 Tee 技術(觸發內(nei) 體(ti) 逃逸)結合並利用了兩(liang) 個(ge) 實體(ti) 的特性,以實現極其有效的核酸遞送到細胞中。事實上,新一代脂多胺含有親(qin) 脂部分(例如脂質)和帶電多胺部分(例如陽離子聚合物)。這些部分協同作用,確保緊密的核酸壓縮和保護以及內(nei) 體(ti) 膜非常有效的去穩定,從(cong) 而允許在胞質溶膠中釋放大量核酸並攝取DNA核。特別關(guan) 注可生物降解實體(ti) 的合成。這樣,轉染試劑不會(hui) 幹擾細胞機製,每次實驗都能保持高細胞活力,並避免任何潛在的副作用。
轉染效率與(yu) 高轉基因表達水平或高基因沉默以及最小化細胞毒性相結合取決(jue) 於(yu) 多個(ge) 關(guan) 鍵參數。這些因素包括細胞類型、質粒 DNA 特征(大小、啟動子、報告基因)和純度、siRNA 序列和純度、細胞培養(yang) 條件(含或不含血清的培養(yang) 基、細胞數量、無汙染……)、核酸和試劑的量、轉基因測定僅(jin) 舉(ju) 幾例。因此,需要根據待遞送的核酸(DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA 等)和所使用的細胞類型專(zhuan) 門設計轉染試劑,以達到最佳效率。
脂轉染法特別適用於(yu) 永生化細胞。
Tee 技術的主要優(you) 勢是:
納米顆粒中 DNA 的壓縮被細胞有效內(nei) 化
保護核酸免遭核酸酶降解
高效的膜去穩定和 DNA 遞送
即使核酸含量低也能高效
生物降解性
該協議是一個(ge) 非常簡單的過程:
1. 準備 DNA 和試劑溶液。
2. 將它們(men) 混合在一起並孵育 20 分鍾。
3. 添加到您的單元格中。