Cytion 細胞培養指南

Cytion 為(wei) 細胞係培養(yang) 提供全麵的指南，強調無菌和無菌技術的重要性。我們(men) 的方案可確保在一係列細胞類型和應用中成功進行細胞培養(yang) 。

1. 實驗室設計

設計組織培養(yang) 實驗室需要周密的規劃，以確保在安全高效的環境中生產(chan) 高質量的材料。最佳設施包括用於(yu) 檢疫和處理未受汙染材料的不同區域，每個(ge) 區域都有專(zhuan) 用的培養(yang) 箱。當空間不允許按區域分開時，建議在時間上分開處理不同的材料。嚴(yan) 格的清潔方案和至少遵守 2 類密封水平對於(yu) 最大限度地降低汙染風險和維持受控的實驗室環境至關(guan) 重要。

2. 建立無菌工作空間

• 引擎蓋實踐：通過正確定位引擎蓋窗扇並避免雜亂(luan) 來保持層流氣流。

• 滅菌：移液器吸頭、玻璃移液器等高壓滅菌工具，並使用70%乙醇進行表麵消毒。

3. 介質和試劑製備

• 培養(yang) 基選擇：查閱我們(men) 詳細的培養(yang) 基圖表，將您的細胞係與(yu) 適當的 DMEM 或 RPMI 培養(yang) 基相匹配，並輔以胎牛血清 (FBS) 和穀氨酰胺等添加劑。

• 補充劑的無菌性：所有培養(yang) 基和補充劑必須無菌，必要時采用過濾滅菌。

• 個(ge) 人防護裝備：在細胞培養(yang) 實驗室中，最大限度地減少傷(shang) 害依賴於(yu) 嚴(yan) 格遵守個(ge) 人防護裝備，例如符合 EN374-3 標準的手套。

• 消毒：最大限度地減少傷(shang) 害還取決(jue) 於(yu) 正確使用次氯酸鈉或乙醇等消毒劑。為(wei) 了實驗室衛生的全麵安全性和有效性，下表詳細介紹了其他消毒劑及其具體(ti) 使用案例：

 4. 培養(yang) 環境設置

• 用於(yu) 貼壁細胞係的燒瓶：經過組織培養(yang) 處理的燒瓶通常足以容納大多數細胞係。對於(yu) 需要額外支持的某些細胞類型，可以對燒瓶進行預處理或用明膠或纖連蛋白等底物包被。這些塗層可以顯著改善細胞附著和增殖。詳細的製備和包衣方案可在相應的產(chan) 品信息表中找到。

• 用於(yu) 懸浮細胞係的燒瓶：使用專(zhuan) 為(wei) 非貼壁細胞設計的燒瓶，可使其自由移動和充分的氣體(ti) 交換。這些燒瓶不需要促進細胞附著的表麵處理。

5. 監測細胞健康狀況

維持細胞培養(yang) 的健康是細胞培養(yang) 工作的一個(ge) 重要方麵。持續監測對於(yu) 確保實驗結果的完整性和可重複性至關(guan) 重要。以下是監測細胞健康狀況的詳細做法：

5.1.每日檢查

• 顯微鏡評估：每天使用顯微鏡檢查細胞，評估細胞健康的關(guan) 鍵指標，包括一致的細胞附著、特征形態和預期的生長模式。尋找細胞大小和形狀的均勻性、是否存在不同的細胞核以及是否缺乏可能表明細胞死亡的顆粒度。

• 生長率監測：跟蹤增殖率，確保其與(yu) 細胞係的預期倍增時間一致。生長速率的突然變化可能表明細胞健康或培養(yang) 條件存在潛在問題。

• 培養(yang) 基評估：檢查培養(yang) 基的顏色，它可以指示 pH 值的變化。泛黃的培養(yang) 基表明酸度增加，通常是細胞代謝或細菌汙染的副產(chan) 品，而紫色或粉紅色調則表明更堿性的環境。

5.2.廢棄培養物的標準

• 汙染指標：警惕汙染跡象，例如培養(yang) 基渾濁、意外的 pH 變化或微生物菌落的存在。汙染物可以是細菌、真菌或病毒，每種類型都有不同的視覺線索，例如細菌膜或真菌菌絲(si) 。

• 形態異常：如果細胞表現出與(yu) 正常生長或分化無關(guan) 的持續形態異常變化，則可能需要丟(diu) 棄培養(yang) 物。這包括廣泛的細胞變圓、脫離或細胞碎片的存在。

• 不可逆應激跡象：尋找不可逆應激或毒性的跡象，例如空泡形成、膜起泡或凋亡小體(ti) 。這些通常是細胞死亡的前兆，並可能影響實驗結果。

• 生長條件退化：如果培養(yang) 物已達到匯合或過度生長，導致營養(yang) 耗盡和廢物積累，則應將培養(yang) 物進行傳(chuan) 代培養(yang) 或丟(diu) 棄，以避免對細胞健康產(chan) 生負麵影響。

6. 傳代策略

傳(chuan) 代培養(yang) 或分裂細胞是細胞培養(yang) 的常規部分，涉及將細胞培養(yang) 物的一部分轉移到新鮮的生長培養(yang) 基中以繁殖培養(yang) 物。仔細的規劃和執行對於(yu) 此過程的成功至關(guan) 重要。以下是一些有效傳(chuan) 代的增強策略：

計劃分割

• 最佳分流比：根據細胞係特征、生長速率和培養(yang) 物的預期用途確定理想分流比。對於(yu) 快速生長的細胞，這可能涉及 1:2 的分割；對於(yu) 生長較慢的細胞係，可能需要 1:10 的分割。

• 供應商規格：請參閱供應商的產(chan) 品表，了解針對每個(ge) 細胞係的具體(ti) 建議，其中通常包括詳細的傳(chuan) 代培養(yang) 方案和細胞所需的條件。

• 培養(yang) 的連續性：維護主細胞庫並使用一致的傳(chuan) 代培養(yang) 程序，以確保細胞係的壽命和遺傳(chuan) 穩定性。

7. 介質維護

及時補充營養(yang) ：應在細胞耗盡必需營養(yang) 之前更換培養(yang) 基，這對於(yu) 細胞的生長和代謝功能至關(guan) 重要。

pH 值和毒素控製：定期改變可防止代謝副產(chan) 物的積累並維持對細胞健康至關(guan) 重要的生理 pH 值。

8. 通道數控製

傳(chuan) 代限製：保留細胞傳(chuan) 代的詳細日誌。頻繁傳(chuan) 代會(hui) 導致遺傳(chuan) 漂變，從(cong) 而改變細胞表型和行為(wei) 。通過限製傳(chuan) 代次數，可以保持細胞係的遺傳(chuan) 穩定性和完整性。

傳(chuan) 代數記錄：每次細胞傳(chuan) 代培養(yang) 時，記錄傳(chuan) 代數。該信息對於(yu) 跟蹤細胞係曆史和識別細胞行為(wei) 中潛在的傳(chuan) 代相關(guan) 變化至關(guan) 重要。

9. 確保細胞係完整性

• 驗證記錄：定期驗證細胞係身份（例如，通過短串聯重複（STR）分析）並在記錄中對此進行注釋，以確保在整個(ge) 實驗中使用正確的細胞係。

• 突變監測：如果可能，監測可能表明遺傳(chuan) 漂變或細胞係汙染的關(guan) 鍵遺傳(chuan) 或表型變化，並保存這些記錄以供參考。