cytion細胞培養解離技術概述

細胞培養(yang) 物解離是細胞培養(yang) 物維持的關(guan) 鍵步驟。它涉及將細胞從(cong) 其生長表麵分離以進行傳(chuan) 代培養(yang) 或收獲。本節概述了兩(liang) 種主要方法：使用無酶解離緩衝(chong) 液和使用酶試劑。

1. 使用無酶細胞解離緩衝液

該方法非常溫和，無需使用酶即可保持細胞完整性：

1. 準備

• 確保所有試劑在使用前加熱至 37°C，以避免對細胞造成衝(chong) 擊。

2. 去除生長培養(yang) 基：

• 從(cong) 培養(yang) 容器中丟(diu) 棄舊的生長培養(yang) 基。

3. 漂洗

• 每個(ge) T75 燒瓶或 100 mm 培養(yang) 皿用 5 ml 不含鈣和鎂的 PBS 衝(chong) 洗細胞單層。

• 在室溫下輕輕搖動容器 30 至 60 秒。

• 吸出並丟(diu) 棄衝(chong) 洗溶液。

• 再次重複此衝(chong) 洗步驟。

4. 解離

• 將大約 5 ml 無酶細胞解離緩衝(chong) 液添加到容器中。

• 在室溫下輕輕搖動 1 至 2 分鍾，然後在顯微鏡下檢查解離情況。

• 如有必要，用手輕敲燒瓶或培養(yang) 皿以去除細胞。

• 如果細胞貼壁，讓它們(men) 在室溫下再靜置 2 至 5 分鍾，並根據需要再次敲擊，使用更多的解離緩衝(chong) 液。

• 細胞分離後，添加至少 5 ml 全生長培養(yang) 基以中和解離緩衝(chong) 液並重懸細胞。

5. 活力檢查

• 在傳(chuan) 代培養(yang) 過程中監測細胞活力，確保其保持在 90% 以上。

2. 使用其他試劑進行解離

該方法允許使用各種解離試劑：

1. 去除用過的介質

• 丟(diu) 棄培養(yang) 容器中的舊介質。

2. 洗滌細胞

• 用不含鈣和鎂的平衡鹽溶液清洗細胞，或使用 EDTA。

• 將洗滌液輕輕添加到細胞對麵，並搖動容器 1 至 2 分鍾，然後丟(diu) 棄洗滌液。

3. 解離

• 每 25 平方厘米的生長表麵塗抹 2 至 3 毫升所選的解離溶液，確保覆蓋細胞片層。

• 將容器在 37°C 下孵育並輕輕搖動。解離通常發生在 5 至 15 分鍾內(nei) ，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 細胞係。

• 對於(yu) 頑固的細胞，敲擊容器可以加快這一過程。

• 仔細觀察細胞以防止過度暴露和潛在的損壞。

4. 收獲細胞

• 一旦細胞分離，將其直立，讓它們(men) 收集在容器底部。

• 添加完整的培養(yang) 基，然後通過移液到細胞層上分散並收集細胞。

• 計數並繼續傳(chuan) 代。

在這兩(liang) 種方法中，重要的是通過經驗觀察確定每個(ge) 細胞係的最佳條件。該過程應保留細胞活力，在傳(chuan) 代培養(yang) 過程中應定期檢查細胞活力是否超過 90%。這些程序為(wei) 研究人員根據其細胞係的具體(ti) 要求和特征進行調整奠定了基礎。